Type II collagen (CII) is a fibrillar collagen that is primarily located in cartilage tissue. The major molecular form of collagen in cartilage is type II collagen. Type II collagen is also located in the vitreous humor of the eye, the inner ear, the nose, and the intervertebral discs of the spine. The function of type II collagen is to provide tensile strength and give cartilage the ability to resist shearing forces. Mutations of the COL2A1 gene affect the synthesis of type II collagen and cause chondrodysplasias. This is characterized by abnormal cartilage that leads to bone and joint deformities. The degradation of collagen type II is an early indicator of osteoarthritis.
Type II Collagen and Adjuvent Susceptibility to CIA is linked to MHC class II molecules and is dependent upon the species of type II collagen used for immunization. Various species of highly purified Type II Collagen are supplied lyophilized and in solution for use in the induction of arthritis in vivo.
Symbols/Related Terms:
- COL2A1
- pro-alpha 1(II) chain
- Achondrogenesis
- Hypochondrogenesis
- Spondyloepiphyseal dysplasia
- Osteoarthritis (OA)
- Collagen Induced Arthritis (CIA)
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人类医学发展到今天,对某些疑难疾病还是不能彻底根治,如遗传疾病,器官坏死,和糖尿病等。这些疾病仅靠药物治疗只能减缓症状,而器官移植又受捐赠器官有限和免疫排斥等因素的限制而不能推广。干细胞是唯一有可能攻克这些疾病的治疗手段。但长期以来,获取多能干细胞(pluripotentstemcell)的主要来源为人的胚胎。这引起道德和宗教的争议,进而在美国等国家受到法律限制。另外,用异己的胚胎干细胞发展的治疗手段将来还是会遇到免疫排斥的问题。
2006年,日本科学家ShinyaYamanaka领导的实验室第一次证明,通过以反转录病毒为载体转基因表达四个转录因子,可以将小鼠或人的体细胞转变为与胚胎干细胞拥有相似分化和繁殖能力的细胞,命名为诱导性干细胞(iPS)。这一成果具有划时代的意义:1)干细胞的产生可以不再需要破坏胚胎,避免了道德,宗教和法律上的限制;2)不同疾病的诱导性干细胞可衍生出不同类型的疾病模型,为基础研究和药物筛选提供了强大的武器;3)理论上,各种疑难疾病可以通过病人自己的体细胞转变为干细胞,再分化为各种类型的细胞,组织,甚至器官,经过或不经过体外加工后,放回病人体内,治愈疾病。
在本论文中,研究人员成功地用四个转录因子的蛋白完成了由体细胞到诱导性干细胞的转变过程。自始至终,细胞的遗传信息没有受到任何影响。蛋白诱导性干细胞的重大意义包括:1)安全性:转化过程没有使用病毒,没有使用基因,没有任何改变细胞遗传信息的风险;2)普及性:蛋白诱导方法远比基因诱导方法简单易行。这样一来,iPS技术不再被几个资深实验室所垄断。大部分实验室都可以重复蛋白方法而获得iPS。也就是说,蛋白诱导方法大大降低了iPS领域的"门坎"。3)可行性:由于该方法的简单易行,重复性强,它可以被扩大化,产业化,进而被商业化。蛋白诱导干细胞方法将大大降低利用干细胞对病人"量身定做"的治疗手段的成本,使得这一商业模式成为可能。
如果说,ShinyaYamanaka博士的成果第一次使人类看到了一个梦想,那么这篇论文的发表标志着我们从梦想向现实跨出了关键的一大步。
CellStemCell,23April2009doi:10.1016/j.stem.2009.04.005
GenerationofInducedPluripotentStemCellsUsingRecombinantProteins
HongyanZhou1,ShiliWu4,7,JinYoungJoo5,7,SaiyongZhu1,DongWookHan5,TongxiangLin1,SuniaTrauger2,3,GeofferyBien4,SusanYao4,YongZhu4,GarySiuzdak2,3,HansR.Sch?ler5,LingxunDuan6andShengDing1,,
1DepartmentofChemistry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
2DepartmentofMolecularBIOLOGy,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
3CenterforMassSpectrometry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
4ProteomTech,Inc.,3505CADIllacAvenue,SuiteF7,CostaMesa,CA92626,USA
5DepartmentofCellandDevelopmentalBiology,MaxPlanckInstituteforMolecularBiomedicine,R?ntgenstrasse20,Münster48149,Germany
6LD***aInc.,SandownWay,SanDiego,CA92130,USA
7Theseauthorscontributedequallytothiswork
Groundbreakingworkdemonstratedthatectopicexpressionoffourtranscriptionfactors,Oct4,Klf4,Sox2,andc-Myc,couldreprogrammurinesomaticcellstoinducedpluripotentstemcells(iPSCs)(TakahashiandYamanaka,2006),andhumaniPSCsweresubsequentlygeneratedusingsimilargeneticmanipulation(Takahashietal.,2007,Yuetal.,2007).Toaddressthesafetyissuesarosefromharboringintegratedexogenoussequencesinthetargetcellgenome,anumberofmodifiedgeneticmethodshavebeendevelopedandproducediPSCswithpotentiallyreducedrisks(fordiscussion,seeYamanaka,2009,andreferencestherein).However,allofthemethodsdevelopedtodatestillinvolvetheuseofgeneticmaterialsandthusthepotentialforunexpectedgeneticmodificationsbytheexogenoussequencesinthetargetcells.Herewereportgenerationofprotein-inducedpluripotentstemcells(piPSCs)frommurineembryonicfibroblastsusingrecombinantcell-penetratingreprogrammingproteins.WedemonstratedthatsuchpiPSCscanlong-termself-renewandarepluripotentinvitroandinvivo.
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素,明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵,可以用青霉素吗?
2、2015版药典三部,各论中指出,”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养“,”发酵用培养基(采用适宜的不含抗生素的培养基)“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素,而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素,不知大家一般用哪家的,一些常用的,氨苄西林钠,硫酸卡那霉素,氯霉素等,都是用的什么级别,那个厂家的呢?我现在生工的,阿拉丁的,生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的,但是生工生物的抗生素都是进口分装的,不仅仅抗生素,国内很多进口分装的试剂,都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的,基本也就属于只有销售,所以,以后真的生产了,原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题,大家是怎么解决的,一般用的哪家的呢。
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
开个贴,做好准备,已经有战友开始采用CTD格式写申报资料,大家多交流。
或者可以过柱纯化,过柱纯化要加一半的佐剂,所以纯化后浓度要高于500ug/ml为宜,否则要增加免疫的次数。
你可以试着读一下看看。
而没答案
帮帮我
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考研细胞的题答案
2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。
3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。
4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。
5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
▷ 重组蛋白生产平台
▪ HEK293细胞瞬转
▪ CHO细胞
▪ 昆虫细胞/杆状病毒
▪ 酵母细胞
▪ 大肠杆菌发酵
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