Description:
(cat#100400/100401)
flashBAC™istheeasiestandthequickestbaculovirusproteinexpressionsystemavailable.TheflashBAC™expressionvectorsystemisanewplatformtechnologyfortheproductionofrecombinantbaculoviruses,geneticallyoptimizedforproducing100%recombinantvirusinasinglestepthuseliminatingtheneedforplaquepurificationorotherscreeningsystems.Thegeneticoptimizationnotonlypreventparentalvirusfromreplicating,butalsosignificantlyincreasesproteinyield.TheflashBAC™expressionsystemhasbeenspecificallydevelopedforoptimalproteinproductionininsectcells.TheflashBAC™DNAisabaculovirusgenomethathasbeengeneticallyoptimisedtofunctionasarecombinantproteinexpressionvector.Thesystemoffershighlevelsofproteinexpression,iseasytouseandisalsobackcompatIBLewithalltransfervectorsbasedonhomologousrecombination.InthiswaytheflashBAC™systemhasbecometheexpressionofchoiceforthoseneedingoptimalproteinexpressionininsectcells,andincreasinglyinmammaliancellsviatheBacMamsystem.
ThereareaseriesofflashBAC™expressionvectors,eachvaryinginthenumberofgenesdeletedfromthebaculovirusgenometosuitexpressionofdifferentproteins. TheseSelectionBoxesenableyoutotryoutdifferentversionsofflashBAC™inoneconvenientkit:SelectionBoxescontaineitherasingle3reactionkitof flashBAC™,flashBACGOLDandflashBACULTRA(Box1)orasingle3reactionkitof flashBAC,flashBACGOLD,flashBACULTRAandflashBACPRIME(Box2).TheoriginalflashBACexpressionvectorisagoodchoiceforprojectswherethegenetobeexpressedislikelytobesimpleandexpressedinthecytoplasmornucleus.flashBACGOLDisenhancedbythedeletionofthechitinaseandcathepsinproteasegenes.Itprovidessuperiorlevelsofexpressionforanyproteinthatisdestinedforsecretionortobeinsertedinthemembrane,orforanyproteinthatmightbeparticularlyliabletodegradation.flashBACULTRAcontainsdeletionsofthechitinaseandcathepsingenes,asabove,butalsodeletionsofthep10,p74andp26genesandprovidesthebestchoiceforthemostdifficulttoexpressproteins;uitableforcytoplasmic,nucleus,secretedandmembraneproteins.flashBACPRIMEcontainsnogenedeletionsandhasprovenusefulforthereleaseandsubsequentpurificationofintracellularVLPsandproteincomplexes. Ifitisastarterkityouareafter,baculoCOMPLETEistheperfectchoice.Thiskitcontainsallthecomponentsneededtogetstartedwithrecombinantproteinexpressionininsectcells.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。
生物合成人胰岛素注射液,比如诺和灵R笔芯。是单一品种、不是混合的胰岛素。是不含鱼精蛋白的短效胰岛素。
E.coliExpressionSystems.pdf(136.05k)
各位业内前辈,我们正在考虑引进符合GMP认证标准的CHO细胞系,用于表达可做疫苗生产的重组蛋白类。目前已有符合标准信息的是Thermofisher的CHO-S悬浮培养细胞资料,希望能再多了解一些和这株细胞类似的其他公司符合GMP标准的生产株细胞做个比较。谢谢指教!
2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。
3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。
4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。
5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
暂无品牌问答