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Adipogen/SUMO-interacting Motif (SIM) Peptide (Agarose)/AG-40T-0387-R500/500 µl
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ProductTypeProtein
Properties
Source/HostSynthetic
SequenceHumanSUMO-interactingMotif(SIM)peptideconjugatedtoagarose.
CrossreactivityMulti-species
Label/ConjugatesAgarose
FormulationLiquid.In50mMHEPES,pH7.5,250mMNaCl.
OtherProductDataUse:ThisaffinityresinisderivedfromaPIASsequenceandcanbeusedfortheenrichment,isolation,andidentificationofSUMOylatedproteins.Equilibrateresinbywashingwith5-10mldesiredstartbuffer.Bindingandelutionofmaterialisdependentonindividualexperimentalconditions.

Storage:Theagarosecanbere-usedforatleast5-10applicationsifproperlymaintained.Afteruse,cleanresinwith5ml50mMTrispH9.0|1MKCl.Removecleaningsolutionbywashingresinwith5mlstoragebuffer.
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Smallubiquitin-likemodifiers(SUMOs)areafamilyofsmall,relatedproteinsthatareenzymaticallyattachedtotargetproteinsbyaprocesstermedSUMOylation.Thispost-translationalmodificationregulatesmanycellularprocessesincludingDNAtranscriptionandrepair,cellcycleprogression,proteinintracellulartrafficking,andnuclearreceptoractivities.SUMObindingand/orinteractionwithproteinsismediatedbyshortaminoacidconsensussequencestermedSUMO-interactingmotifs(SIMs).Todate,allSIMsappeartocontainahydrophobiccoresequencethatiseitherprecededorsucceededbyanacidicregioncomposedofeitherglutamateoraspartateresiduesorphosphorylatedserineorthreonineresidues.ThehydrophobiccoreofSIMshasbeenshowntointeractwiththeα‑helixandβ2-strandsurfacesonSUMOproteinswhilethenegativelychargedresiduessurroundingthehydrophobiccoreappeartoinfluencebindingaffinitiesanddictatebindingpreferencesforthevariousSUMOisoforms.SIMshavebeenidentifiedinnumeroustypesofproteinsincludingSUMOligases(E3),transcriptionfactors,andtranscriptionalrepressors.
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在不含动物成分的环境下生产的优质产品 摘要:  R&DSystems为研究界生产高品质蛋白已有超过25年的历史。为了支持科研和生物生产的要求,我们提供了在无动物成分的条件下生产和纯化重组蛋白的专门实验室中制造的产品。对于顾虑因痕量动物成分或哺乳动物病原体而引起的实验变量的研究人员来说,不含动物成分的蛋白尤为重要。我们在无动物成分条件下制造的产品与利用传统实验室技术生产的产品拥有相同的生物活性。 √使用不含动物成分的专门设备... 查看更多>
提供商:北京农业生物检测中心 查看更多>
2012生物医药年会(疫苗&重组蛋白) 查看更多>
Western Blotting依然是目前分离和检测蛋白最常用到的一种技术方法,但是要将这种技术变成你的有利手段,并不容易。因此优化实验操作手册至关重要,但是,正如Bio-Rad成像系统市场经理Ryan Short所说的,“大多数研究人员并不是Western blot技术专家——他们要解答的是更大的问题”,Ryan继续说道,“问题是大多数人都不知道何处需要优化。坦率地说,Western blot检测过程耗时太长 查看更多>
一般认为,在几乎所有的后生动物(metazoans), 尤其是脊椎动物中,都普遍存在选择性剪接,这就为从单基因产生多种功能性多肤提供了一'条经济的途径。根据 EST(expressedsequencedtag,表达序列标签)序列定位和对合成的mRNA (resultant mRNA) 家族进行图谱分析的结果,估计约有 35% 的人类基因能产生多种不同的剪接产物。 查看更多>
2021-09-09
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美国Scripps研究所,ProteomTech公司,和德国马克斯普朗克分子生物医学研究所等机构的科研人员成功地利用重组蛋白诱导体细胞生成多能干细胞。较之传统的依赖于病毒载体的诱变方法,这一划时代的新方法无需使用任何形式的外源性遗传物质,从而消除了传统方法中不可避免的对靶细胞自身基因组的影响,而且更加简便快捷。这项成果已经在最近一期的"细胞·干细胞"期刊发表,并立即引起了包括华尔街日报,NBC和福布斯等在内的各大媒体的广泛关注。

人类医学发展到今天,对某些疑难疾病还是不能彻底根治,如遗传疾病,器官坏死,和糖尿病等。这些疾病仅靠药物治疗只能减缓症状,而器官移植又受捐赠器官有限和免疫排斥等因素的限制而不能推广。干细胞是唯一有可能攻克这些疾病的治疗手段。但长期以来,获取多能干细胞(pluripotentstemcell)的主要来源为人的胚胎。这引起道德和宗教的争议,进而在美国等国家受到法律限制。另外,用异己的胚胎干细胞发展的治疗手段将来还是会遇到免疫排斥的问题。

2006年,日本科学家ShinyaYamanaka领导的实验室第一次证明,通过以反转录病毒为载体转基因表达四个转录因子,可以将小鼠或人的体细胞转变为与胚胎干细胞拥有相似分化和繁殖能力的细胞,命名为诱导性干细胞(iPS)。这一成果具有划时代的意义:1)干细胞的产生可以不再需要破坏胚胎,避免了道德,宗教和法律上的限制;2)不同疾病的诱导性干细胞可衍生出不同类型的疾病模型,为基础研究和药物筛选提供了强大的武器;3)理论上,各种疑难疾病可以通过病人自己的体细胞转变为干细胞,再分化为各种类型的细胞,组织,甚至器官,经过或不经过体外加工后,放回病人体内,治愈疾病。

在本论文中,研究人员成功地用四个转录因子的蛋白完成了由体细胞到诱导性干细胞的转变过程。自始至终,细胞的遗传信息没有受到任何影响。蛋白诱导性干细胞的重大意义包括:1)安全性:转化过程没有使用病毒,没有使用基因,没有任何改变细胞遗传信息的风险;2)普及性:蛋白诱导方法远比基因诱导方法简单易行。这样一来,iPS技术不再被几个资深实验室所垄断。大部分实验室都可以重复蛋白方法而获得iPS。也就是说,蛋白诱导方法大大降低了iPS领域的"门坎"。3)可行性:由于该方法的简单易行,重复性强,它可以被扩大化,产业化,进而被商业化。蛋白诱导干细胞方法将大大降低利用干细胞对病人"量身定做"的治疗手段的成本,使得这一商业模式成为可能。

如果说,ShinyaYamanaka博士的成果第一次使人类看到了一个梦想,那么这篇论文的发表标志着我们从梦想向现实跨出了关键的一大步。
CellStemCell,23April2009doi:10.1016/j.stem.2009.04.005

GenerationofInducedPluripotentStemCellsUsingRecombinantProteins

HongyanZhou1,ShiliWu4,7,JinYoungJoo5,7,SaiyongZhu1,DongWookHan5,TongxiangLin1,SuniaTrauger2,3,GeofferyBien4,SusanYao4,YongZhu4,GarySiuzdak2,3,HansR.Sch?ler5,LingxunDuan6andShengDing1,,

1DepartmentofChemistry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
2DepartmentofMolecularBIOLOGy,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
3CenterforMassSpectrometry,TheScrippsResearchInstitute,10550NorthTorreyPinesRoad,LaJolla,CA92037,USA
4ProteomTech,Inc.,3505CADIllacAvenue,SuiteF7,CostaMesa,CA92626,USA
5DepartmentofCellandDevelopmentalBiology,MaxPlanckInstituteforMolecularBiomedicine,R?ntgenstrasse20,Münster48149,Germany
6LD***aInc.,SandownWay,SanDiego,CA92130,USA
7Theseauthorscontributedequallytothiswork

Groundbreakingworkdemonstratedthatectopicexpressionoffourtranscriptionfactors,Oct4,Klf4,Sox2,andc-Myc,couldreprogrammurinesomaticcellstoinducedpluripotentstemcells(iPSCs)(TakahashiandYamanaka,2006),andhumaniPSCsweresubsequentlygeneratedusingsimilargeneticmanipulation(Takahashietal.,2007,Yuetal.,2007).Toaddressthesafetyissuesarosefromharboringintegratedexogenoussequencesinthetargetcellgenome,anumberofmodifiedgeneticmethodshavebeendevelopedandproducediPSCswithpotentiallyreducedrisks(fordiscussion,seeYamanaka,2009,andreferencestherein).However,allofthemethodsdevelopedtodatestillinvolvetheuseofgeneticmaterialsandthusthepotentialforunexpectedgeneticmodificationsbytheexogenoussequencesinthetargetcells.Herewereportgenerationofprotein-inducedpluripotentstemcells(piPSCs)frommurineembryonicfibroblastsusingrecombinantcell-penetratingreprogrammingproteins.WedemonstratedthatsuchpiPSCscanlong-termself-renewandarepluripotentinvitroandinvivo.
抗生素的发酵生产123
zcqh272021-08-01
1、2015版药典,”生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程“中指出,”用于生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素。配制各种溶液的化学药品应符合《中国药典》(二部)或其他相关国家标准的要求。“
生物制品细胞制备过程中不得使用青霉素或β-内酰胺(β-Lactam)类抗生素,明确表明不准使用青霉素。那么进行的重组蛋白类表达的微生物发酵,可以用青霉素吗?
2、2015版药典三部,各论中指出,”将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基(可含适量抗生素)中培养“,”发酵用培养基(采用适宜的不含抗生素的培养基)“。
这里说明种子培养基中可以使用抗生素,而且也没有限定究竟是哪种抗生素。
3、关于发酵中使用的抗生素,不知大家一般用哪家的,一些常用的,氨苄西林钠,硫酸卡那霉素,氯霉素等,都是用的什么级别,那个厂家的呢?我现在生工的,阿拉丁的,生兴生物的都用过。主要还是用的生工生物的,但是生工生物的抗生素都是进口分装的,不仅仅抗生素,国内很多进口分装的试剂,都无法提供相应的产品质量检测证书。而且因为是分装的,基本也就属于只有销售,所以,以后真的生产了,原材料来源的稳定性也无法保证。请问这个问题,大家是怎么解决的,一般用的哪家的呢。
包涵体的形成是一个由许多蛋白质参与的极端复杂的动力学过程,依赖于蛋白质的折叠速率和聚集速率,并且与蛋白质的合成和降解程度相关。强的表达系统,高的诱导剂浓度,相对较高的培养温度常常造成包涵体的形成。除了外界因素,包涵体的形成依赖于蛋白质特异的折叠行为,而不是蛋白的通常特性,如大小,融合标签,相对的疏水性。尽管如此,限制折叠速率的结构特性,如二硫键的形成常常是含有二硫键蛋白质正确折叠的限速步骤(并不绝对,因为有些蛋白质二硫键的破坏并不影响其功能),富含二硫键的蛋白质具有更为复杂的结构,当高水平表达时,由于大肠杆菌细胞质是一个偏还原性的环境,蛋白质容易形成错配的二硫键,这常常是包涵体形成的主要原因。膜蛋白具有暴露的疏水区,表达时易于聚集形成包涵体,也有可能由于降解或对细胞的毒性作用使得表达水平极低。蛋白质的糖基化可以影响到蛋白质的折叠行为和溶解性,当它们在原核系统进行表达时,也容易聚集。
防止包涵体常用的方法:使用中等强度或弱的启动子,低温培养,有限的诱导,优化培养基条件,进行融合表达,与伴侣分子和折叠酶共表达,表达定位于不同的空间,选择突变的菌株或其他的原核表达系统。
增加蛋白质折叠的添加剂:添加剂可能的作用机制甘油对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度L-精氨酸两亲分子/渗压剂甘氨酰甜菜碱/山梨糖醇 对蛋白质具有优先的水合作用阿拉伯聚糖 增加黏度木糖醇 增加黏度乙醇 调节极性DMSO 调节极性
两性离子表面活性剂(Zwitterionic detergents)保护非极性表面Triton X-100保护非极性表面硫代甜菜碱类物质(NDSBs)保护非极性表面蔗糖/海藻糖对蛋白质具有优先的水合作用/增加黏度N-氧化三甲胺(TMAO)对蛋白质具有优先的水合作用/渗压剂三氟乙醇(TFE)促进二级结构的形成低浓度盐酸胍使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性低浓度尿素使部分折叠的中间体不稳定/增加天然构象蛋白质的溶解性配体稳定天然结构状态聚乙二醇保护熔球体(molten globule)/增加黏度需要强调的是在培养细菌时,在培养基中加入5%的乙醇可以起到一定的防止包涵体产生的作用。
对比另外一篇文章:
减少包涵体形成的策略降低重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成。2. 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响二硫键的形成)和NaCl。3. 供给丰富的培养基,创造最佳培养条件,如供氧、pH等。

开个贴,做好准备,已经有战友开始采用CTD格式写申报资料,大家多交流。


可以跑SDS-PAGE电泳,不插梳子,每次一块板子点样200ul,跑完了切胶,攒几次之后,用灭菌的研钵研磨,边磨边加PBS,注意不要加多了,一定要研磨得很细,研磨之后用1ml的注射器过一边,不堵塞说明就可以打兔子了。每次打兔子的胶不超过1.5ml,首次蛋白的量要高一些,400-500ug,以后两次减半,一般三次就可以了。我们实验室有人做过。
或者可以过柱纯化,过柱纯化要加一半的佐剂,所以纯化后浓度要高于500ug/ml为宜,否则要增加免疫的次数。
美迪西在做重组蛋白表达方面很有经验,
希望能把问题写的更为明确一些。
你可以试着读一下看看。
怎么好多只有题

而没答案
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给我提供答案
考研细胞的题答案
1.在悬浮培养液中培养Sf9细胞,并使之适应无血清培养液。

2.准备旋转培养瓶,用于按比例扩增Sf9细胞,将合适大小的两孔盖连接在转瓶的一个 侧臂,另用一平盖接在另一侧臂。将一段短管(约6英寸或15 cm)装在通气孔中,末端连接一滤器,借助张力器用管索将管子与通气孔和滤器固牢。

3.将一段长管(30~60 cm)连接至进气孔,并在末端连接一滤器,用管索加固,另一段管子连接于滤器的另一端,用管索固牢。管子末端用铝箔封好。

4.将与两孔装置相对的侧壁上的盖子旋转90度以松开,高压灭菌培养瓶1 h。

5.将适应了无血清培养液的细胞接种于经高压灭菌的培养瓶中。将培养瓶装至半
举例如下,分别的特点,可以分别百度搜索查看。
▷ 重组蛋白生产平台
▪ HEK293细胞瞬转
▪ CHO细胞
▪ 昆虫细胞/杆状病毒
▪ 酵母细胞
▪ 大肠杆菌发酵
重组蛋白的话,一般在蛋白冻干或最终制得之前,都会进行纯化,一般的生物公司可以纯化纯度到达90%,就是不会有其他的杂蛋白存在。做抗体或者抗原等都不会对免疫有影响的,如有你的里面其他杂蛋白多的话,建议先做蛋白纯化(亲和纯化,分子筛都可,一般的亲和纯化,带有his标签或者GST标签都可到达最少85%以上的纯度)
提供亲和纯化相关资料:http://wenku.baidu.com/view/ef8f3831f8c75fbfc67db276
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