蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验一基本方案
| 实验方法原理 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 蛋白质 试剂、试剂盒 | 琼脂糖4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾 仪器、耗材 | 天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 1.制备CNBr-活化的琼脂糖4B 以下步骤必须在通风橱中小心进行。用3mol/LNaOH将琼脂糖4B悬液调整为pH11.2，用pH计进行检测。在天平上放置一烧瓶，重量归零，将0.67g固体CNBr溶解在少量水中，小心塞住烧瓶口。边搅拌（KPG或螺旋搅拌器，不要用磁力搅拌器）边将CNBr溶液小心加入凝胶悬液中，持续保持pH11.2，可用3mol/LNaOH调节。当pH6min保持不变时，立刻用1L水通过布氏漏斗或玻璃料冲洗凝胶。 2.连接蛋白 冲洗CNBr-活化的琼脂糖悬液（20ml）并转移到相同体积的0.1mol/LNaHCO3溶液，pH8.2。加入0.5mol/LNaCl和0.2g蛋白质。悬液室温振荡3h或4℃过夜。测定上清中的蛋白质含量从而确定被固定的蛋白质量。加入5ml1mol/L氨基乙酸以封闭剩余活性基团。首先用0.1mol/LpH4.0乙酸钠-乙酸冲洗凝胶，再用0.1mol/LpH7.6的磷酸二氢钾冲洗。为了储存凝胶，最后还需加入NaN3，使其终浓度达到0.1mol/L。 注意事项 | 展开 其他 | 试剂： 琼脂糖4B，悬液，6.6g溶于20mlH2O 3mol/LNaOH（Mr＝40.0；12g溶于100ml水中） 溴化氰（CNBr，Mr＝105.9） 0.1mol/LNaHCO3（Mr＝84.0；0.84g/L100ml）pH8.2，含0.5mol/LNaCl（Mr＝58.4；2.92g/100ml） 1mol/L氨基乙酸（Mr＝75.1；1.5溶于20mlH2O） 0.1mol/L乙酸钠-乙酸，pH4.0 0.1mol/L磷酸二氢钾，pH7.6 |
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发布于 ： 2018-08-10
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