1. 用完全培养基培养 CHO 细胞，这样当细胞转入无异亮氨酸培养基培养时，细胞汇合率达 50%~60% 且处于对数生长期。
2. 吸弃培养基，用预温的无异亮氨酸的培养基冲涮一次细胞，加入无异亮氨酸的培养基，37℃ 孵育 40~48 小时。
3. 要重新释放细胞的话，就撤换培养基，用含异亮氨酸的预温 DMEM 培养基洗涮细胞两次，之后加入完全培养基。
一、双胸苷同步化法
1. 往指数生长期细胞培养物中加入 2 mmol/L 的胸苷，孵育 12 小时。
2. 600 g 离心，去含胸苷培养基，换上正常培养基轻轻重悬细胞，让细胞生长 10~12 小时使完全走出 S 期。
3. 加入胸苷至 2 mmol/L，孵育 12~14 小时。
4. 600 g 离心，去含胸苷培养基，换上正常培养基释放同步化细胞。
5. 取样，用流式细胞计量仪监测细胞通过 S 期的进程。
二、含羞草氨酸俘获法
1. 往指数生长期细胞中加入腺苷至终浓度为 2 mmol/L，孵育 12 小时。
2. 600 g 离心，去含胸苷培养基，用正常培养基轻轻重悬细胞，培养 10~12 小时让其走完 S 期。
3. 加入终 400 μm 的含羞氨酸终止细胞生长。
4. 继续培养 12~14 小时，让细胞走完 G1 期，止于 G1/S 边境。
5. 撤换含羞草氨酸培养基，于 37℃ 用 DMEM 培养基洗涮细胞，加入预温至 37℃ 的完全生长培养基让细胞释放生长。
6. 取样，用流式细胞计量仪监测细胞通过 S 期的进程。
1. 往 175 cm2 规格的培养瓶中接种细胞，培养至汇合率达 60%~80%。
2. 用力敲打培养瓶 10 次，然后吸去培养液，以去除松散贴壁的细胞，死细胞和细胞碎片。
3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 诺考达唑的预温培养基，重新放回温箱孵育 4 小时。
4. 将培养瓶中的培养液转入无菌试管中。
5. 中等用力拍击培养瓶以剥离有丝分裂细胞，用 5 ml 原来的含诺考达唑培养液涮洗瓶子两次，再转入一支新的试管中。收集到的有丝分裂的细胞能室温放置，然后处理其余的培养瓶。每只瓶子的细胞产量为 3X105~4X106 。
6. 合并所有瓶中的有丝分裂细胞，分析有丝分裂细胞的百分比。
7. 要得到 G1 期细胞，600 g，37℃ 离心 8 分钟，用不含诺考达唑的培养基于 37℃ 重悬细胞，每 175 cm2 规格培养瓶接种 1X107 细胞，培养 3~4 细胞，收获。
1. 准备下列仪器：
洗脱离心机
装有一个大容器中的 20 L 培养基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室温
20 个 1 L 的锥形瓶，用以收集各洗脱组分
2. 至少提前 10 天开始培养细胞，进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太大的饱和度。
3. 按洗脱仪提供的说明，安装转头和离心机，加入去离心水启动整个系统。
4. 细胞装在 1 L 的瓶子中，600 g，离心 25 分钟。
5. 倒尽上清，合并所有的细胞沉淀至一支 50 ml 规格的管中，终体积 40~50 ml。
6. 将上述浓缩的细胞悬液通过一支装有 18# 针头的注射器，打散细胞团块。
7. 显微镜检查细胞，如果有必要，用更小的针头重复处理直至大于 95% 的是单细胞。
8. 往洗脱系统中泵入含 0.5%~1% FCS 的培养基。
9. 参考洗脱仪附带的说明进行适当的细胞注入操作。
10. 首先分离个体小的 G1 期细胞，慢慢提高流速。
11. 当细胞室内看起来似乎没有什么细胞时，停止转头，维持流速，洗脱出残余的细胞。
12. 一边洗脱，一边用 Channelyzer 计数细胞和测量细胞大小。洗脱完毕，有必要分析各组细胞所位于的细胞周期的哪一阶段。
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