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大规模制备和浓缩反转录病毒原液实验一离心法
来自 : 蚂蚁淘
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 将产病毒细胞按1:10或1:20从刚生长汇片的细胞分传至20~50个10cm培养皿中,培养细胞至50%~90%汇片。

2. 弃去培养液,轻轻加入半量的培养液,注意培养液碱性不要过大,培养2~3天。
 
3. 收取上清,用0.45μm的滤器过滤,贮存于-70℃或-80℃,或马上进行滴定和浓缩。
 
4. 滴定病毒原液。
 
5. 对于大体积病毒原液,用无菌的250ml离心瓶和JA-14转子在4℃,25000g离心20min,对于小体积的病毒原液,用SW-27或SW-41Ti转子20000r/min离心10min。使用前,用70%乙醇淋洗离心管以防细菌污染。
 
6. 将上清直接倒入消毒的离心瓶中,用JA-14转子14000r/min 离心5~16h,或用SW-27或SW-41Ti转子20000r/min离心2h。

7. 离心在4℃进行,小心除去上清,用原病毒体积,0.1%~1%的DMEM-10重悬沉淀。
 
8. 将病毒分装成5~50μl的小份,贮存于-70℃或-80℃。滴定经浓缩的或未经浓缩的病毒各1份。
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