去除宿主细胞组分等非病毒杂质,提取出高纯度浓缩的病毒样品。病毒提纯是
病毒学研究的重要前提,病毒微细形态结构的研究、病毒抗原蛋白的分离提纯、
病毒化学成分及其遗传物质-
DNA
或
RNA
的详细研究都需要高纯度的病毒样品。
病毒纯度只是一个相对的概念,很难有绝对的标准,通常以下几点可以作为判
定依据。
物理均一性
:测定病毒样品的物理均一性,是证明其纯度的常用方法,包
括电镜检查、病毒粒子沉降系数和扩散常数及其在凝胶电泳、等电聚焦中的迁
移率等。
病毒滴度与蛋白含量的比例
:测定病毒材料的感染力或其血清学反应、滴
度与其蛋白含量的比例,也是一种通常采用的纯度测定方法。病毒滴度对蛋白
含量的比例越高,说明病毒的纯度越高。
免疫学反应
:免疫反应单一而无非特意反应,则说明病毒材料比较纯净。
结晶形成:
病毒粒子在十分纯净的情况下,经常可以形成结晶,但少数混
有杂质的病毒样品亦可形成结晶,所以这也只是一个相对标准。
病毒纯化方法
:
1
超速离心法,其中的平衡梯度密度离心是常用的方法,在该溶液里加入
少量大分子溶液,则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降,比溶剂密
度小的部分就会上浮,最后在重力和浮力平衡的位置,集聚形成大分子带状物。
因为病毒颗粒跟其他生物分子大小不一样,所以病毒在梯度离心过程中形成独
特的条带,从而达到分离纯化的效果。但此法对仪器的要求很高,转速至少
30000rpm/min
,在这个转速下要求离心时间
7-8
小时。
2
现在开发出各种亲和树脂,能有效地吸附病毒粒子,从而达到病毒纯化
的目的。
Biomiga
公司所开发的病毒纯化系列试剂盒,
采用新型材料,
能有效吸
附腺病毒、腺相关病毒、慢病毒等,加入适当浓度的离子溶液将病毒粒子解离
回收,最后对病毒进行脱盐处理,所得病毒纯度高,整个操作简便,极大地缩
短了纯化时间,针对需要纯化大量病毒的客户提供大量提取试剂盒,满足客户
不同需要。