质粒的制备
【实验目的】
1.
了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用；
2.
掌握质粒
DNA
分离和纯化的原理；
3.
学习碱裂解法和煮沸法分离质粒
DNA
的方法。
【实验原理】
质粒是细菌内的共生型遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞特定
的表型。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天
然质粒相比
,
质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因
(
如抗生素抗性基
因
)
和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，
并去掉了大
部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一
些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于
序列测定的单链
DNA
、体外转录外源
DNA
序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大
量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（
1
）分子量小、多拷贝、松
驰控制型；（
2
）具有多种常用的限制性内切酶的单个酶切位点；（
3
）能插入较大的
外源
DNA
片段；（
4
）具有容易操作的检测表型。常用的质粒载体大小一般在
1kb
至
10kb
之间，如
pBR322
、
pUC
系列、
pGEM
系列和
pBluescript
（简称
pBS
）等。经过改
造的基因工程质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介，这种基因的运
载工具在基因工程中具有极广泛的用途，而质粒的分离与提取则是基因工程最常用、
最基本的实验技术。
一般分离质粒
DNA
的方法都包括
3
个步骤：①培养细菌，使质粒
DNA
大量扩增；
②收集和裂解细菌；
③分离和纯化质粒
DNA
。
分离制备质粒
DNA
的方法很多，
其中常用
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发布于 ： 2018-08-03
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