病毒 DNA 的提取实验一拭子标本中病毒 DNA 的提取
| 实验方法原理 | |||||||||||
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| 实验材料 | 拭子标本 试剂、试剂盒 | TE缓冲液裂解液蛋白酶K 仪器、耗材 | 离心机棉签 实验步骤 | 预操作：将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于2ml生理盐水中，洗下标本。若标本在4h内处理，可置于室温保存，否则需4℃保存。 1.将生理盐水中的标本以2000r/min离心5min,沉淀细胞。 2.吸去上清液，若有血液残留，可1mlTE缓冲液悬浮细胞，移至Ep管中，重复离心1次。 3.去上清液，如仍有血液残留，可重复第2步，直至沉淀物中无红细胞痕迹为止。 4.用50~300µ1裂解液悬浮细胞，使细胞达到10~1000个/µl。 5.用55℃,1h消化裂解细胞，释放DNA,然后95℃,10min灭活蛋白酶K。 6.10000r/min离心5min,取上清液做DNA模板。 注意事项 | 其他 | 1.TE缓冲液由10mmol/LTris-HCl(pH8.0)和1mmol/LEDTA组成。 2.裂解液由50mmol/LKCl、10mmol/LTris-HCl(pH8.3)、2.5mmol/LMgCl2、100µg/ml蛋白酶K、1%Laureth-12和0.5%Tween-20组成。 |
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发布于 ： 2018-08-03
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