将基因转移至未分化ES细胞实验一ES细胞电穿孔
| 实验材料 | 线性化转移基因DNA未分化ES细胞 仪器、耗材 | 电穿孔仪和电穿孔杯neoR-MEF滋养板ES生长培养基 实验步骤 | 1.准备下列试剂和材料： 线性化转移基因DNA（1mg/ml，溶于无菌TE） 未分化ES细胞 Bio-Rad电穿孔仪和电穿孔杯 100mmneoR-MEF滋养板 ES生长培养基 含300μg/mlG418的ES生长培养基 2.收获未分化ES细胞，以107/ml悬于ES生长培养基。 3.吸取无菌DNA加入电穿孔杯。加入0.8mlES细胞，轻轻吹吸混合，不要产生气泡。 4.室温电穿孔DNA/细胞混合物：250μF，0.3kV。 5.ES生长培养基1:10稀释电穿孔细胞，接种neoR-MEF滋养层，密度为106细胞/100mm滋养板。放于37℃湿润的5%CO2温箱。 6.接种48小时后，换含300μg/mlG418的培养基。 7.隔天换液。 |
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发布于 ： 2018-08-03
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