上皮细胞类培养实验一内皮细胞培养实验
| 实验方法原理 | 内皮细胞易于从血管分离进行培养成单层细胞，对研究内皮细胞再生生、肿瘤促血管生长因子（TAF）等有很大应用价值。人内皮细胞培养可应用人脐带脐静脉、动物大动脉等，用灌流消化法获取细胞最为简便。 | ||||||||
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| 实验材料 | 脐带 试剂、试剂盒 | 胶原酶消化液PBS 仪器、耗材 | 注射器离心管培养基 实验步骤 | 1. 取产后的新鲜脐带；如不立即培养可保存于4℃中，但不宜超过12小时；无菌剪取长10~15厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管，亦可用于培养； 2. 先用三通注射器吸温PBS液注入脐带的脐静脉中，洗除残血；注入口处宜用线绳结扎，以防液体返流； 3. 用血管钳夹紧脐带一端，从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1%的胶原酶，待末端出现液体后结扎之，令充满血管，注入口应应结扎，以防液体返流，消化3~10分钟； 4. 吸出含有内皮细胞的消化液，注入离心管中；为获取更多细胞，可再注入温PBS冲洗2~3次彻底清除干净残余细胞，一并注入离心管中离心； 5. 吸除上清，加1640培养液，制成细胞悬液，接种入瓶皿中培养，顺利时2~3 天内细胞即可长成单层。  其他 | 一、讨论 内皮细胞生长后，开始细胞成梭形，类成纤维细胞，连接成片后始显内皮细胞形状。 首次用胶原酶消化时，应做预试验，以找出最佳消化时间，以防止消化不足细胞未脱落，也避免因消化过度使内皮细胞底层成纤维细胞混入。我们曾试用胰蛋白酶消化，效果远不如胶原酶好。 人脐带易于获得，培养效果好；细胞生生后，一般传6~7代后即衰退，难以长期维持。 用兔血管内皮细胞培养较好，可传10~30代；不同部位血管内皮细胞生物学性状不同，对各种作用因素反应亦有很大差别。 |
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发布于 ： 2018-08-06
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