实验方法原理 | |||||||||||
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实验材料 | 酶样品 试剂、试剂盒 | 磷酸钾MgCl2丙酮酸二磷酸硫胺二硫赤藓糖醇辅酶ANAD+磷酸转乙酰酶乳酸脱氢酶羟胺FeCl3试剂 仪器、耗材 | 分光光度计 实验步骤 | 注意事项 | 其他 | 试剂: 0.1mol/L磷酸钾,pH7.6 0.1mol/LMgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203mg溶于10ml水中) 0.1mol/L丙酮酸(丙酮酸钠,Mr=110.0;110mg溶于10ml水中) 0.01mol/L二磷酸硫胺(脱羧辅酶,Mr=460.8;46.1mg溶于10ml水中) 0.1mol/L二硫赤藓糖醇(DTE,Mr=154.2,或二硫苏糖醇、DTT,Mr=154.2;154mg溶于10ml水中) 0.01mol/L辅酶A(游离酸,Mr=767.5,CoA·Li3,Mr=785.4;23mg溶于3ml水中) 0.1mol/LNAD+(游离酸,Mr=663.4;663mg溶于10ml水中) 磷酸转乙酰酶(4000U/ml) 乳酸脱氢酶(10000U/ml) 2mol/L羟胺(等量的4 mol/L氯化羟胺,Mr=69.49和4mol/LKOH,Mr=56.11混合) FeCl3试剂 100ml5%FeCl3(8.33gFeCl3·6H2O,Mr=270.3,用0.1mol/LHCl补充至100ml) 100ml12%TCA(三氯乙酸,Mr=163.4) 100ml3mol/LHCl(1:3的比例混合HCl和H2O) 将三种溶液混合 |