人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验一优化胶粘贴法
| 实验方法原理 | 用OB胶和FS生物蛋白胶法分别建立胃癌原位种植动物模型,观察和比较两种方法所建立的模型肿瘤生长状况、转移情况和形态学变化。 | ||||||
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| 实验材料 | ALBPcnuPnu裸鼠 试剂、试剂盒 | OB吻合胶生物蛋白胶 实验步骤 | 一、实验材料准备 ALBPcnuPnu裸鼠20，雌性，4～6周龄，体重18～20gSPF级条件下饲养。 二、裸鼠皮下移植瘤的建立和传代 1. 收集体外培养的SGC27901细胞，使细胞含量为5×107/mL ，取0.4mL腹腔注入，当腹水形成明显时取腹水细胞培养，然后调整细胞含量至5×107/mL。 2. 取0.2mL注入另一只裸鼠背部皮下，当皮下移植瘤长至直径1cm左右时取出移植瘤，将瘤组织切成约1～2mm的小块，经18号套管针送至另一只鼠皮下，做鼠间传代共5代。 三、原位移植模型的建立 1. 将传代鼠脱颈处死，无菌操作，从背部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好的鱼肉状的瘤组织，切成1mm×1mm×1mm的小块，置于生理盐水中备用。 2. 腹腔注射40mg/kg体重的0.1%的异戊巴比妥钠麻醉裸鼠，常规皮肤消毒，沿左侧腹部正中旁线切开，切口约1.5cm，小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射针头轻微损伤胃大弯中部浆肌层，以出血为度。 3. 取7只裸鼠,将2～3块肿瘤组织用医用OB吻合胶粘合在胃壁破损处，另外7只裸鼠，将2～3块肿瘤组织用丰联生物蛋白胶粘合在胃壁破损处(图1，见彩插3。)，待胶干后，分别用4-0号线缝合腹膜、腹壁，关腹。 四、处死动物及移植瘤的观察 1. 定时观察所有裸鼠全身状况、运动情况、腹部体征。 2. 当荷瘤鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时，脱颈处死解剖，取原位瘤、胸腹腔脏器和肿大淋巴结，收取腹水。 3. 所取标本经10%甲醛固定，石蜡包埋、切片、HE染色，做组织病理学检查。 五、统计学分析 用SPSS10.0统计软件，定性资料间的比较采用χ2检验，定量资料间的比较采用t检验。 其他 | 一、实验讨论 建立最符合人体胃癌自然生长状态的胃癌侵袭和转移模型是研究胃癌发病机制及预防和治疗措施的关键所在。随着1966年无胸腺小鼠的出现及1975年裸大鼠的重新建群，将人类肿瘤组织或细胞直接接种于裸鼠身上，建立人类肿瘤动物模型的方法日趋成熟。20世纪80年代末期，进一步研究发现,移植的肿瘤能否发生转移，不仅取决于瘤细胞本身的转移潜能，还需要宿主本身器官环境因素的参与。在所有的植入途径中，原位移植最易发生类似人类肿瘤的转移过程，从此，形成了人胃癌转移模型的原位种植技术，即用癌细胞悬液注射种植于裸小鼠胃壁而成。随着实验方法的不断完善，人们又发现将完整瘤组织块原位接种建立的胃癌转移鼠模型，既具备原位移植的优点，又保持了癌组织结构上的完整性，所以，原位移植成功率、转移率、荷瘤鼠中位生存期等指标均很高，能更好的模拟临床胃癌病人疾病的发生、发展过程，在此基础上，人们逐渐摸索了缝挂法、胃囊法、胶粘贴法等胃癌原位种植造模方法，使实验操作越来越简便，模型的成瘤率和转移率均有提高，尤其是OB胶粘贴法,直接将传代的肿瘤组织粘贴在胃壁上，手术操作简单，对裸鼠的创伤小，术后恢复快，成活率非常高。 但是，医用OB胶在临床上一般用于造瘘口和吻合口的封闭，为无色或淡黄色透明液体，在组织液、血液等带阳离子物质存在下迅速固化，增加吻合口的封闭性和吻合强度，其主要成分为α-氰基丙烯酸酯类物质，在体内不能完全被吸收，扫描电镜观察其由直径213nm的细小纤维构成网络，红细胞不易通过，有明显的促进血液凝固、血块收缩效应，因为胶体不能马上吸收，机械性的封闭作用有可能影响肿瘤组织的外生性生长，使肿瘤中心容易发生坏死，而FS生物蛋白胶的主要成分为可被机体吸收的纤维蛋白原，大约2周左右，生物胶将被机体完全吸收，这时裸鼠胃壁肿瘤刚好进入快速生长期，因此，不会对肿瘤的生长状态造成任何影响。目前，采用生物蛋白胶粘贴法建立裸鼠胃癌原位种植动物模型的方法文献还没有报道。我们的研究结果表明，OB胶粘贴法建立的裸鼠胃癌原位种植动物模型，肿瘤中心容易发生大片坏死，而改用易吸收的FS生物蛋白胶粘贴法可解决这一问题，更好的满足实验需要，与OB胶组相比，FS生物蛋白胶组动物模型更容易出现腹水和幽门梗阻，原位肿瘤的直径相对大些。上述特点均表明，可吸收的FS生物蛋白胶在建立胃癌原位种植动物模型时与OB胶相比具有更大的优势，FS生物蛋白胶法建立的胃癌转移动物模型，能更好的重现人体胃癌的临床转移过程，为人类胃癌的生长、转移机制及抗转移治疗方面的研究提供更理想的动物模型。 |
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发布于 ： 2018-08-06
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