请使用支持JavaScript的浏览器! 基因传递到肝脏实验一基本方案2 重组腺病毒通过耳外静脉注射到兔的肝脏_蚂蚁淘,【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall -蚂蚁淘商城
当前位置: > 首页 > 技术文章 >
基因传递到肝脏实验一基本方案2 重组腺病毒通过耳外静脉注射到兔的肝脏
来自 : 蚂蚁淘
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

1.将成年实验兔放置于固定盒内。用浸取了温水的纱布反复擦拭使其耳内血管膨胀。

也可使用70%的乙醇。注意其静脉血管位于耳朵外缘,动脉游走于中心。

2.在5ml注射器上装上21G蝶形针头,然后吸入3ml腺病毒悬液,排除注射器内的空气。注射器内含有一定量的空气可使所有的溶液被注射入内。

3.扎入蝶形针头至兔耳静脉,并沿血管行进足够的深度以方便固定针头。开始以lml/min的速率注射腺病毒。在蝶形针头内留滞少量的溶液,注意一定不能注射人任何空气。

4.移出针头,然后迅速用纱布垫子压住扎口止血。

5.用凉水轻柔的清洗兔耳。并在兔耳上涂抹少量凡士林。观察兔子10~15min,如果兔看起来要昏睡,抚摸它保持其清醒。并立起或移动固定盒。

支持方案收获肝组织以分析转基因表达

如果转基因编码的蛋白分泌至循环系统,那么其表达可经抽取动物血液并通过对血浆中的蛋白进行免疫杂交(如CPMB单元10.8)或酶学试验(如CPMB单元11.2)来验证。对于胞内或膜蛋白,肝组织收获后,转基因表达常应用免疫组化或免疫荧光(如CPMB第14章)、酶学试验(通常用冰冻切片或石蜡切片)、免疫杂交进行分析。可采用多重时间点来监控转基因表达的水平和持续时间。

1.注射腺病毒后,改善环境以侍养实验鼠或兔3~5d。用绳带将动物的脚固定至解剖器上,使其腹部朝上,并保持其四肢伸展。

2.用70%的乙醇润湿动物腹部的毛发。用镊子夹起其腹部的皮肤并沿中线切割,将其皮肤与腹壁分离。使用镊子提起其腹壁,继续沿中线切割,注意不要损伤其内脏。再在剖面的侧位进行一些切割,然后将其皮肤和腹壁翻折过来。

3.小心的切除肝脏,避免用镊子夹住肝脏组织。将其放置于灭菌的塑胶盘上。用两片干净的刀片将肝组织切碎。保持一把刀片与切割方向一致,然后拖动另一刀片来切割其邻近组织。

4.将肝组织样品按以下一种或多种方法进行保存。

a.石蜡切片。将切割的组织碎片(几毫米)置入福尔马林缓冲液中。包埋前固定过夜或更久。

b.新鲜冰冻切片。切碎的组织放人塑料模具中(对于小鼠肝脏,22mmX22mm大小的模具即可容纳一片大的或两片小的肝组织),然后用OCT复合物进行覆盖。在通风橱中放置一个较浅的容器,装入约1in(约2.5cm)的2-甲基丁醇以及于冰球或磨碎干冰。当其冷却后,将塑料模具放入容器中,使得2-甲基丁醇的冷却程度与OCT的相当。当完全冰冻后,将样品保存于一70°C。在低温恒温器中切割前先预冷至一20°C。

c.RNA纯化(Northernblot)或蛋白制样(immunoblots)。应从一些不同的肝叶中切取组织,并放人标记好的冻存管内。投入液氮中,并保存至一70°C。

展开 
免责声明 本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
相关文章