包涵体沉淀溶解实验
| 试剂、试剂盒 | 缓冲液AN-十二烷基肌氨酸钠（SKL)考马斯亮蓝（CBB)染色液脱色液快速蛋白质斑点印迹试验用试剂 仪器、耗材 | SDS-PAGE电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)分子量标准参照物 实验步骤 | 材料与设备 SDS-PAGE电泳装置 聚丙烯酰胺小胶（10%) 分子量标准参照物 试剂 缓冲液A N-十二烷基肌氨酸钠（SKL)(20%水溶原液） 考马斯亮蓝（CBB)染色液 脱色液 快速蛋白质斑点印迹试验用试剂(见P.172) (配方，见「试剂的配制」，PP.184~189) 操作程序 1)第2次2%D0C悬液（见p.149),于离心前取6x50-ul等分试样。然后将这些样品用微型离心机全速离心1min,弃上清。 2)各沉淀物中分别加入100ul含0%、0.1%、0.2%、0.3%和0.6%SKL的缓冲液A。沉淀物剧烈重悬后静置10min,再用微型离心机离心lmin，取上清样品，供快速蛋白质斑点印迹试验用（见PP.172-173)，观察沉淀物的多少。 3)每份上清作SDS凝胶电泳，并与样品A、B—起做快速蛋白质斑点印迹试验。 4)作凝胶电泳分析时，于10%的SDS凝胶上，样品A、B、C、D及0.1%SKL上清、0.2%SKL上清、0.3%SKL上清、0.4%SKL上清、0.6%SKL上清各加样20ul,分子量标准参照物加样3ul,120V(20mA)电泳约60min。 5)凝胶用CBB染色液染色30min后，置脱色液中漂洗、脱色，直至显现条带。 |
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发布于 ： 2018-08-10
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