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天然蛋白 疏水层析问题?
2010-05-28
问题描述:

我现在在纯化天然蛋白时第一步层析使用的是苯基的疏水层析柱,样品和缓冲液的硫酸铵浓度为0.5M,PH在5.6左右,发现蛋白能结合到柱子上,但是在洗脱时采用梯度洗脱洗不下来,最后用水洗也洗不下来,后来我用少量的0.15M的氢氧化钠洗出一高峰,请问,这是因为我的蛋白结合的太牢吗?该怎样解决呢?
再就是疏水层析和PH值有这么大的关系吗?
谢谢!

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bobechanles
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对,你这个是因为蛋白和pheny结合太牢固,从你的情况看,水都洗不下来,除非添加有机溶剂才能洗下来(如乙醇等),但这样往往会影响蛋白的活性。所以phenyl填料可以基本不要试了,你可以选用比phenyl疏水更弱的填料,如ether,PPG可以试试。
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对,你这个是因为蛋白和pheny结合太牢固,从你的情况看,水都洗不下来,除非添加有机溶剂才能洗下来(如乙醇等),但这样往往会影响蛋白的活性。所以phenyl填料可以基本不要试了,你可以选用比phenyl疏水更弱的填料,如ether,PPG可以试试。
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对,你这个是因为蛋白和pheny结合太牢固,从你的情况看,水都洗不下来,除非添加有机溶剂才能洗下来(如乙醇等),但这样往往会影响蛋白的活性。所以phenyl填料可以基本不要试了,你可以选用比phenyl疏水更弱的填料,如ether,PPG可以试试。
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