货号：	HZ-DAG1-8
供应商：	沪震生物
数量：	20
英文名：	RecombinantDystrophinAssociatedGlycoprotein1(DAG1)
保质期：	12个月
保存条件：	2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
规格：	盒

DAG1重组蛋白主要有原核表达系统和真核表达系统和无细胞表达系统。
英文名称：RecombinantDystrophinAssociatedGlycoprotein1(DAG1)
Dystroglycan1;156DAG;A3a;AGRNR;DAG;Alpha-Dystroglycan;Beta-Dystroglycan 
仅供体外研究使用，不用于临床诊断！请索取进口关税税单及报关单！
物种Homosapiens(Human，人)相同的名称，不同的物种。来源原核表达宿主E.coli内毒素水平<1.0EU/µg(LAL法测定)亚细胞定位细胞膜,分泌预测分子量25.9kDa实际分子量28kDa(差异分析请参阅说明书)片段与标签Arg25~Ser234withN-terminalHisTag缓冲液成份20mMTris,150mMNaCl缓冲液（pH8.0,含有1mMEDTA,1mMDTT,0.01%SKL,5%Trehalose和Proclin300）性状冻干粉纯度>90%等电点8.2应用PositiveControl;Immunogen;SDS-PAGE;WB.如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。规格10ug50ug200ug1mg1g
用法：Reconstitutein20mMTris,150mMNaCl(pH8.0)toaconcentrationof0.1-1.0mg/mL.Donotvortex.
DAG1重组蛋白储存：避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。
稳定性：热稳定性以损失率显示。损失率是由加速降解试验决定，具体方法如下：在37°C孵育48小时，没有显著的降解或者沉淀产生。保质期内，在适当的条件下存储，损失率低于5%。

DAG1重组蛋白原核表达鉴定详细实验步骤
1.表达鉴定第一天的任务，常用抗性选择根据感受态细胞选择
1）拿到质粒，离心（3000r/min；2min)·在质粒中加入TE【使质粒最终加入到110μL感受态细胞中的量为80-100ng，据此确定加入TE的量】，一
般为(1μg质粒加20μLTE；2μg质粒加50μLTE；5μg质粒加100μLTE)·将质粒与TE混匀，吸取2μL混液与感受态细胞混匀
2）将感受态细胞放入冰箱（4℃）中，30min
3）取出后立即放入水浴锅中（42℃），热激90s,
DAG1重组蛋白活性蛋白整体方案ActiveProteinSolutions
 4）再次放入冰箱（4℃）中，3min
5）拿出后取200μL的LB液体培养基加入到已转入质粒的感受态细胞中
6）放入摇床（37℃;195r)中,30nim至60min;(最佳45min)
7）取出离心（3000r/min；2min)·去掉200μL的上清，留100μL左右上清悬浮沉淀，吸取50μL悬液涂平板，【先将对应抗性的平板放入培养箱（37℃）中预热20min】
8）把平板放入培养箱（37℃），过夜（12h至16h）
2.表达鉴定第二天的任务，注意Pcold表达载体的表达温度
1）每个平板挑取单菌落至4支对应抗性的LB(4ml)试管中，编号为“0”“1”“2”“3”
2）将试管放入摇床（37℃；195r)中，【单抗3h左右；双抗4h左右；刚开始用可见分光光度计测OD值；熟练后可目测（背光下，以试管中的枪头为例，刚刚看不见枪头即可）】，测OD值（0.6至0.8）
3）从“0”号管中取700μL悬液加入到100μL（C=80%）的保种甘油中，震匀，放入冰箱（-20℃）冻存
4）在每组菌的“1”“2”“3”号试管中分别加入2μL的IPTG【终浓度0.5mM最适，可根据日后表达摸索】
5）视不同的载体选择适合的表达环境【PET/PGEX：15℃表达过夜；25℃表达6h；37℃表达3h至4h（4支
试管，“0”“1”号试管15℃表达过夜；“2”“3”试管37℃表达3h至4h）。Pcold：【全部15℃表达过夜】
3.表达鉴定第三天，全菌的表达鉴定分析，注意控制溶质的量及溶液黏度
1）从每组4支的试管中均取500μL菌液加入到1.5ml离心管中，【若OD值不一样，值小的可多取】离心
（6000r/min)，5min,去上清，留沉淀【沉淀少的，可再取菌液离心，尽量使沉淀量接近】
2）在每个离心管中加入500μL的DDH2O,悬浮沉淀，离心（6000r/min)，5min,去上清，留沉淀
·在每支离心管中加入45μL的1×PBS和45μL的2×LoadingBuffer悬浮沉淀【当溶质适量且均一的情况
下，加入量不变；当溶质多且粘稠时，应使加入量增大，为降低粘度也可减少上液量】
3）放入煮样器（100℃）25min
4）取出后离心（6000r/min)3min,电泳检测。
5）蛋白表达量不错，进行蛋白纯化；蛋白表达量低或者没表达，可参考原核表达FAQ相对应解决方案解决。
4.蛋白纯化：见蛋白纯化专题。
DAG1重组蛋白为什么要纯化：
重组蛋白一般用转基因动物的乳腺产生，所以获得的重组蛋白是存在于动物的乳汁当中的。而显然在乳汁中存在大量不同种类的蛋白、糖、脂肪等物质，所以为了获得高纯度的重组蛋白，必须对获得的乳汁进行抽提和纯化。
在原核蛋白表达体系中，如E.coli（大肠杆菌表达系统），外源基因通常需要诱导剂的诱导才能进行表达，本文详细讲述了常用诱导剂IPTG诱导原理，对外源蛋白诱导表达原理以及实验步骤。
原核生物绝大多数的基因按功能相关性成簇地排列，且密集于染色体上，共同形成一个转录单位——操纵子，也称基因表达的协同单位。E.coli的乳糖操纵子含Z、Y及A三个结构基因，分别编码β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）、通透酶（permease）和乙酰基转移酶（transacetylase)；此外还有调控基因：操纵序列O（operator）、启动序列P（promoter）；而I(编码Lac阻遏物，Lacrepressor)不属于乳糖操纵子。