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| Product Name | Orexin B, human |
| Size | 1 mg |
| Catalog # | AS-65573 |
| US$ | $263 |
| Purity | Peak Area by HPLC ≥95% |
Orexins are synthesized by posterolateral neurons in hypothalamus. They bind to orexin-1 (OxR1) and orexin 2 (OxR2) receptors. Orexin A can bind to both OxR1 and OxR2 while Orexin B can associate with OxR2 only. Both Orexins are involved in the regulation of arousal and sleep states, energy homeostasis, and autonomic central control. | |
| Detailed Information |  Datasheet Material Safety Data Sheets (MSDS) |
| Storage | 20°C |
| References | 1. Martynska L., et.al., Neuroendocr Lett 4(26), 289-292 (2005).2. Ebrahim I.O., et.al., J of Royl Soc of Med95, 227-230 (2002).3. Ramanjaneya M., et.al., Endocrinology151 (7), 3169-3180 (2010). |
| Molecular Weight | 2898.9 |
| RSGPPGLQGRLQRLLQASGNHAAGILTM-NH2 | |
| Sequence(Three-Letter Code) | Arg - Ser - Gly - Pro - Pro - Gly - Leu - Gln - Gly - Arg - Leu - Gln - Arg - Leu - Leu - Gln - Ala - Ser - Gly - Asn - His - Ala - Ala - Gly - Ile - Leu - Thr - Met - NH2 |
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2017-12-08
基因编辑系统 CRISPR-Cas9 因其作为消除 DNA 中致病变异性的潜在用途而使人兴奋。但是大多数 CRISPR 系统依靠病毒将 Cas9 复合物整合到细胞中，然后进行该细胞 DNA 序列切除工作。这样的病毒载体系统有风险：一些病人体内已经具有抗病毒的抗体，或者他们自体可以产生这些抗体来增加免疫排斥的可能性。 麻省理工学院的科学家已经开发出一种 Cas9 病毒载体的替代法：纳米粒子法，它可以将 CRISPR 作用机制整合到细胞... 查看更多
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2021-08-02
在一项新的研究中，来自英国爱丁堡大学、皮尔布赖特研究所和Genus公司（Genusplc）的研究人员培育出基因编辑猪。这些猪可能免受一种每年导致养猪业损失数十亿欧元的病毒感染。相关研究结果于2017年2月23日发表在PLoSPathogens期刊上，论文标题为“PrecisionengineeringforPRRSVresistanceinpigs:MacrophagesfromgenomeeditedpigslackingCD163SRCR5domainarefullyresistanttobothPR 查看更多
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2017-02-09
常州百代生物科技有限公司在发布的国际专利RFectMN单核、悬浮细胞小核酸siRNA/miRNA转染试剂供应信息，浏览与国际专利RFectMN单核、悬浮细胞小核酸siRNA/miRNA转染试剂相关的产品或在搜索更多与国际专利RFectMN单核、悬浮细胞小核酸siRNA/miRNA转染试剂相关的内容。 查看更多
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2017-03-03
货号：SL100566 查看更多
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2017-11-15
CRISPR由两部分组成，一部分是可以切割基因的“手术刀”蛋白Cas9，另一部分是拖着“手术刀”在基因组的“茫茫大海”中精确定位的向导RNA（核糖核酸）。一些科学家用灭活版本的Cas9蛋白与向导RNA结合，改造出只有精确定位功能的CRISPR技术，可用来关闭或打开几乎任何单个基因，或者精细地调控它们... 查看更多
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2017-09-06
微生物与人体细胞之间通过信号分子实现密切交流：如配体与膜结合型 G 蛋白耦联受体（GPCR）的相互作用。
为了了解这些“神秘”的配体，Rockefeller 大学小分子基因编码研究室主任 Sean Brady 领导了 Rockefeller 大学和西奈山 Icahn 医学院的科研人员进行了相关研究，具体内容于 8 月 30 日发表在 Nature 期刊，题为“Commensal Bacteria Make GPCR Ligands That Mimic Human Signalling Molecu 查看更多
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2017-09-18
产品：拟南芥crispr基因编辑服务 查看更多
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2018-12-19
美国Delta Biolabs品牌产品目录/代理商价格 查看更多
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2021-08-06
赛业（广州）生物科技有限公司是TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）技术服务商之一，从事TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）技术服务，您可以搜索更多相关的TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）产品。而生物在线将会为您在TALEN技术制备基因敲除小鼠（大鼠）方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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2021-09-16
美国研究小组使用CRISPR-Cas9基因编辑技术，成功修复了镰状细胞病患者造血干细胞中的致病突变基因，为治疗β-地中海贫血症、重症联合免疫缺陷甚至艾滋病等多种疾病指明了新方向。 查看更多
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2017-10-12
上海邦耀生物科技有限公司在发布的TALEN技术制备基因敲除大鼠供应信息，浏览与TALEN技术制备基因敲除大鼠相关的产品或在搜索更多与TALEN技术制备基因敲除大鼠相关的内容。 查看更多
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2021-08-28
代理品牌ScienCell公司-----原代细胞、培养基、细胞转染试剂盒，ScienCell公司主要产品有：<br><br>ScienCell原代细胞<br>ScienCell专用培养基<br>ScienCell细胞检测试剂盒<br>ScienCell细胞转染试剂盒<br><br> 查看更多
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RNA干扰技术在动物体内应用的研究进展123
小军医2021-07-31
欲研究某基因的功能，只知道现在很多干扰实验是在细胞水平体外进行实验的．不清楚目前能否应用RNA干扰在小鼠或其它动物上进行，这种设计是否可行．
请有经验的战友指点，若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章．
非常感谢！
请有经验的战友指点，若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章．
非常感谢！
crispr 表达质粒 需要入核表达吗123
赤色军团1582021-09-12
ZFN
ZFN，即锌指核糖核酸酶，由一个 DNA 识别域和一个非特异性核酸内切酶构成。DNA 识别域是由一系列 Cys2-His2锌指蛋白（zinc-fingers）串联组成（一般 3~4 个），每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基。锌指蛋白源自转录调控因子家族（transcription factor family），在真核生物中从酵母到人类广泛存在，形成alpha-beta-beta二级结构。其中alpha螺旋的16氨基酸残基决定锌指的DNA结合特异性，骨架结构保守。对决定DNA结合特异性的氨基酸引入序列的改变可以获得新的DNA结合特异性。多个锌指蛋白可以串联起来形成一个锌指蛋白组识别一段特异的碱基序列，具有很强的特异性和可塑性，很适合用于设计ZFNs。与锌指蛋白组相连的非特异性核酸内切酶来自FokI的C端的96个氨基酸残基组成的DNA剪切域(Kim et al., 1996)。FokI是来自海床黄杆菌的一种限制性内切酶，只在二聚体状态时才有酶切活性(Kim et al., 1994)，每个FokI单体与一个锌指蛋白组相连构成一个ZFN，识别特定的位点，当两个识别位点相距恰当的距离时（6~8 bp），两个单体ZFN相互作用产生酶切功能。从而达到 DNA 定点剪切的目的。
TALEN
TALENs中文名是转录激活因子样效应物核酸酶，TALENs是一种可靶向修饰特异DNA序列的酶，它借助于TAL效应子一种由植物细菌分泌的天然蛋白来识别特异性DNA碱基对。TAL效应子可被设计识别和结合所有的目的DNA序列。对TAL效应子附加一个核酸酶就生成了TALENs。TAL效应核酸酶可与DNA结合并在特异位点对DNA链进行切割，从而导入新的遗传物质。相对锌指核酸酶(zinc-finger nuclease, ZFN)而言，TALEN能够靶向更长的基因序列，而且也更容易构建。但是直到现在，人们一直都没有一种低成本的而且公开能够获得的方法来快速地产生大量的TALENs。
CRISPR
CRISPR是生命进化历史上，细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器，简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌，利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出CRISPR系统，利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是细菌特有的免疫系统。微生物学家10年前就掌握了细菌拥有多种切除外来病毒基因的免疫功能，其中比较典型的模式是依靠一个复合物，该复合物能在一段RNA指导下，定向寻找目标DNA序列，然后将该序列进行切除。许多细菌免疫复合物都相对复杂，其中科学家掌握了对一种蛋白Cas9的操作技术，并先后对多种目标细胞DNA进行切除。以往研究表明，通过这些介入，CRISPR能使基因组更有效地产生变化或突变，效率比TALEN（转录激活因子类感受器核酸酶）等其他基因编辑技术更高。但最近研究发现，虽然CRISPR有许多优点，在人类癌细胞系列中，它也可能产生大量“误伤目标”，尤其是对不希望改变的基因做修改。
三种系统的比较
那么，可能会有人疑问了，既然如此，这三种系统的区别和联系又是什么呢？特意从有效性，特异性，载体性及其它四个方面，进行了一个小小的总结。
有效性
在不同的基因位点基因靶向性的有效性都是不同的，并且这也依赖于每种细胞的转染的效率。因此，只能点对点的比较靶向位点，细胞系和转染方法，这样的比较才有意义。基于我们课题组和其他课题组的ZFN和TALENs的靶向效率的实验，我们在细胞系水平上进行了比较，虽然他们可能与不同的突变特征有关。Chen的课题组的最近的研究进行了大规模的体外分析，发现TALENs在使用与上下游相关的序列的时候比ZFNs显著的具有更多的突变产生。另一个组比较了TALENs和CRISPRs在人类ESCs细胞中的情况，观察到，通过用CRISPR更换掉TALENs，在其他方面条件相同的情况下，通过产生更多的基因突变的克隆，本质上提高了效率。最近，功能上重新编码的TALENs（reTALENs）已经得到了发展，并且在人类的iPSCs细胞中的基因编辑的有效性相比较于CRISPR得到了提高。但是这个研究发现，CRISPR比reTALENs能够实现7-8倍的同源重组效率，并且其一定程度的比HE更有效率，挡雨ODN捐赠者进行比较。
特异性
ZFN和TALENs都是作为二聚体发挥作用的，其特异性是由DNA绑定的区域决定的，这个区域在每个剪切位点最多可以识别36bp。然而，在在II型CRISPR系统中的Cas9是由一种RNA引导的核酸，它的特异性是由PAM和PAM上游的20个引导核苷酸决定的。这表明，3’12个碱基的“种子序列”是最关键的，而剩下的8个碱基（非种子序列）甚至PAM序列都是可以错配的。ZFN的特异性由一种不带偏见的全基因组分析进行，并且发现存在频率低，但是可以检测到的脱靶事件的发生，其可以定义为一个高度有限的一部分。已经有研究表明，TALENs有比ZFN更低的细胞毒性和脱靶效率。
基于这个研究，TALENs诱导的CCR5特异性突变在CCR5的对偶基因上发生率是17%，而在高度同源的CCR2位点上只有1%。相反，CCR5特异性的ZFN的活性在这两个位点是相在当的，CCR5位点的突变频率是14%，而CCR2的是12%。几个研究也报告了，CRISPR/Cas系统在细胞毒性评价或者DSB诱导的检测（即，H2AX免疫染色）中都没有明显的脱靶现象。然而，最近的研究发现，CRISPR诱导的靶向不同的人类细胞的基因出现了显著的脱靶现象。例如，靶向CCR5的CRSIPR/Cas9系统偶到的在CCR2上的脱靶切除的突变率为5-20%，这是非常接近之前讨论的CCR5靶向的ZFN诱导的突变率。三个其他的小组利用更系统的方法在人类细胞中评估了CRISPR的脱靶活性，其结果表明CRISPR可能能够发生目标不匹配，从而在预测的脱靶位点上引入微缺失或者插入（插入缺失）。此外，靶向位点的定位和内涵能够显著的影响gRNA识别他们的靶向目标，而在基因组序列中的“脱靶序列”也是一样的。已经有报告说，脱靶效应能够通过小心的控制Cas9的mRNA的浓度来克服。此外，在基因编辑的时候使用配对的Cas9的切口酶已经表明能够显著的减少至少1500倍的脱靶活性。
病毒为基础的传递
ZFN基因可以通过慢病毒和腺病毒进行传递。当前，ZFNs导入体细胞是通过共转染两个慢病毒载体，每个载体编码一个功能性异源二聚体对的一个单体。相反，腺病毒，但不是基于HIV的慢病毒，载体使用与TALEN的基因的传递，因为TALENs的大尺寸和TALE重复序列的种应用。Cas9也是一个较大的基因，并且其酶促死的版本也可以通过慢病毒进行传递，虽然也盛行的Cas9的稳定的表达对于细胞的毒性依然是不清楚的。
其他方面
ZFNs和TALENs都能够在切割时产生粘性末端，因此可以使用标签绑定，如果具有互补突出部分的双链寡聚核苷酸（dsODN）是可以进行预测的。ZFNs和TALENs都可以在捐赠的质粒的基因组中引入同一个核酸靶向位点来实现。ZFNs和TALENs通过采取同源二聚体的方式从而获得优势，绑定门通过设计实现了重组（Ob-LiGaRe）。这种方法在使用的质粒中倒置了两半的核酸酶的结合位点，这是在没有改变接头区的方向实现的，因此通过相同的ZFN/TALEN碱基对能够阻止连接产物的消化。因为CRISPR产生了一个非粘性末端，直接连接会遇到挑战。最近的文章表明，具有Cas9n的gRNAs的碱基对能够诱导具有徒步部分的DSBs，并且促进dsODN的高效率的NHEJ介导的插入。虽然至今还没有出版，但是进入的转基因大小的DNA能够通过引入在目标质粒的CRISPR/Cas9靶向位点的具有CRISPR/Cas的基因组使用。CRISPR/Cas系统相比较于ZFNs和TALENs具有几个优势，例如易于构建，花费低，并且产物具有可扩展性，并且能够用于多个靶向基因组位点。
ZFN，即锌指核糖核酸酶，由一个 DNA 识别域和一个非特异性核酸内切酶构成。DNA 识别域是由一系列 Cys2-His2锌指蛋白（zinc-fingers）串联组成（一般 3~4 个），每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基。锌指蛋白源自转录调控因子家族（transcription factor family），在真核生物中从酵母到人类广泛存在，形成alpha-beta-beta二级结构。其中alpha螺旋的16氨基酸残基决定锌指的DNA结合特异性，骨架结构保守。对决定DNA结合特异性的氨基酸引入序列的改变可以获得新的DNA结合特异性。多个锌指蛋白可以串联起来形成一个锌指蛋白组识别一段特异的碱基序列，具有很强的特异性和可塑性，很适合用于设计ZFNs。与锌指蛋白组相连的非特异性核酸内切酶来自FokI的C端的96个氨基酸残基组成的DNA剪切域(Kim et al., 1996)。FokI是来自海床黄杆菌的一种限制性内切酶，只在二聚体状态时才有酶切活性(Kim et al., 1994)，每个FokI单体与一个锌指蛋白组相连构成一个ZFN，识别特定的位点，当两个识别位点相距恰当的距离时（6~8 bp），两个单体ZFN相互作用产生酶切功能。从而达到 DNA 定点剪切的目的。
TALEN
TALENs中文名是转录激活因子样效应物核酸酶，TALENs是一种可靶向修饰特异DNA序列的酶，它借助于TAL效应子一种由植物细菌分泌的天然蛋白来识别特异性DNA碱基对。TAL效应子可被设计识别和结合所有的目的DNA序列。对TAL效应子附加一个核酸酶就生成了TALENs。TAL效应核酸酶可与DNA结合并在特异位点对DNA链进行切割，从而导入新的遗传物质。相对锌指核酸酶(zinc-finger nuclease, ZFN)而言，TALEN能够靶向更长的基因序列，而且也更容易构建。但是直到现在，人们一直都没有一种低成本的而且公开能够获得的方法来快速地产生大量的TALENs。
CRISPR
CRISPR是生命进化历史上，细菌和病毒进行斗争产生的免疫武器，简单说就是病毒能把自己的基因整合到细菌，利用细菌的细胞工具为自己的基因复制服务，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出CRISPR系统，利用这个系统，细菌可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是细菌特有的免疫系统。微生物学家10年前就掌握了细菌拥有多种切除外来病毒基因的免疫功能，其中比较典型的模式是依靠一个复合物，该复合物能在一段RNA指导下，定向寻找目标DNA序列，然后将该序列进行切除。许多细菌免疫复合物都相对复杂，其中科学家掌握了对一种蛋白Cas9的操作技术，并先后对多种目标细胞DNA进行切除。以往研究表明，通过这些介入，CRISPR能使基因组更有效地产生变化或突变，效率比TALEN（转录激活因子类感受器核酸酶）等其他基因编辑技术更高。但最近研究发现，虽然CRISPR有许多优点，在人类癌细胞系列中，它也可能产生大量“误伤目标”，尤其是对不希望改变的基因做修改。
三种系统的比较
那么，可能会有人疑问了，既然如此，这三种系统的区别和联系又是什么呢？特意从有效性，特异性，载体性及其它四个方面，进行了一个小小的总结。
有效性
在不同的基因位点基因靶向性的有效性都是不同的，并且这也依赖于每种细胞的转染的效率。因此，只能点对点的比较靶向位点，细胞系和转染方法，这样的比较才有意义。基于我们课题组和其他课题组的ZFN和TALENs的靶向效率的实验，我们在细胞系水平上进行了比较，虽然他们可能与不同的突变特征有关。Chen的课题组的最近的研究进行了大规模的体外分析，发现TALENs在使用与上下游相关的序列的时候比ZFNs显著的具有更多的突变产生。另一个组比较了TALENs和CRISPRs在人类ESCs细胞中的情况，观察到，通过用CRISPR更换掉TALENs，在其他方面条件相同的情况下，通过产生更多的基因突变的克隆，本质上提高了效率。最近，功能上重新编码的TALENs（reTALENs）已经得到了发展，并且在人类的iPSCs细胞中的基因编辑的有效性相比较于CRISPR得到了提高。但是这个研究发现，CRISPR比reTALENs能够实现7-8倍的同源重组效率，并且其一定程度的比HE更有效率，挡雨ODN捐赠者进行比较。
特异性
ZFN和TALENs都是作为二聚体发挥作用的，其特异性是由DNA绑定的区域决定的，这个区域在每个剪切位点最多可以识别36bp。然而，在在II型CRISPR系统中的Cas9是由一种RNA引导的核酸，它的特异性是由PAM和PAM上游的20个引导核苷酸决定的。这表明，3’12个碱基的“种子序列”是最关键的，而剩下的8个碱基（非种子序列）甚至PAM序列都是可以错配的。ZFN的特异性由一种不带偏见的全基因组分析进行，并且发现存在频率低，但是可以检测到的脱靶事件的发生，其可以定义为一个高度有限的一部分。已经有研究表明，TALENs有比ZFN更低的细胞毒性和脱靶效率。
基于这个研究，TALENs诱导的CCR5特异性突变在CCR5的对偶基因上发生率是17%，而在高度同源的CCR2位点上只有1%。相反，CCR5特异性的ZFN的活性在这两个位点是相在当的，CCR5位点的突变频率是14%，而CCR2的是12%。几个研究也报告了，CRISPR/Cas系统在细胞毒性评价或者DSB诱导的检测（即，H2AX免疫染色）中都没有明显的脱靶现象。然而，最近的研究发现，CRISPR诱导的靶向不同的人类细胞的基因出现了显著的脱靶现象。例如，靶向CCR5的CRSIPR/Cas9系统偶到的在CCR2上的脱靶切除的突变率为5-20%，这是非常接近之前讨论的CCR5靶向的ZFN诱导的突变率。三个其他的小组利用更系统的方法在人类细胞中评估了CRISPR的脱靶活性，其结果表明CRISPR可能能够发生目标不匹配，从而在预测的脱靶位点上引入微缺失或者插入（插入缺失）。此外，靶向位点的定位和内涵能够显著的影响gRNA识别他们的靶向目标，而在基因组序列中的“脱靶序列”也是一样的。已经有报告说，脱靶效应能够通过小心的控制Cas9的mRNA的浓度来克服。此外，在基因编辑的时候使用配对的Cas9的切口酶已经表明能够显著的减少至少1500倍的脱靶活性。
病毒为基础的传递
ZFN基因可以通过慢病毒和腺病毒进行传递。当前，ZFNs导入体细胞是通过共转染两个慢病毒载体，每个载体编码一个功能性异源二聚体对的一个单体。相反，腺病毒，但不是基于HIV的慢病毒，载体使用与TALEN的基因的传递，因为TALENs的大尺寸和TALE重复序列的种应用。Cas9也是一个较大的基因，并且其酶促死的版本也可以通过慢病毒进行传递，虽然也盛行的Cas9的稳定的表达对于细胞的毒性依然是不清楚的。
其他方面
ZFNs和TALENs都能够在切割时产生粘性末端，因此可以使用标签绑定，如果具有互补突出部分的双链寡聚核苷酸（dsODN）是可以进行预测的。ZFNs和TALENs都可以在捐赠的质粒的基因组中引入同一个核酸靶向位点来实现。ZFNs和TALENs通过采取同源二聚体的方式从而获得优势，绑定门通过设计实现了重组（Ob-LiGaRe）。这种方法在使用的质粒中倒置了两半的核酸酶的结合位点，这是在没有改变接头区的方向实现的，因此通过相同的ZFN/TALEN碱基对能够阻止连接产物的消化。因为CRISPR产生了一个非粘性末端，直接连接会遇到挑战。最近的文章表明，具有Cas9n的gRNAs的碱基对能够诱导具有徒步部分的DSBs，并且促进dsODN的高效率的NHEJ介导的插入。虽然至今还没有出版，但是进入的转基因大小的DNA能够通过引入在目标质粒的CRISPR/Cas9靶向位点的具有CRISPR/Cas的基因组使用。CRISPR/Cas系统相比较于ZFNs和TALENs具有几个优势，例如易于构建，花费低，并且产物具有可扩展性，并且能够用于多个靶向基因组位点。
SignaGen转染试剂试用装免费申领 细胞技术讨论版论坛123
西港生物2016-07-10
Signagen转染试剂（transfectionreagent）
—DNA转染试剂Polyjet-适用于普遍的哺乳动物细胞
LipoD293-适用于悬浮细胞的转染（包括昆虫细胞SF9）-对于普遍的哺乳动物细胞具有更优异的转染效率
—DNAandsiRNA转染试剂
Lipojet-适用于大多数哺乳动物细胞的转染-低毒性（无需换液）-用量少-DNA/RNA共转染（co-transfection）-效果优于Lipofectamine2000
—siRNA转染试剂
GenMute-适用于大多数哺乳动物细胞转染-低毒性（无需换液）-用量少-DNA/siRNA共转染（co-transfection）PepMute-适用于普遍的哺乳动物细胞的转染
—DNA转染试剂Polyjet-适用于普遍的哺乳动物细胞
LipoD293-适用于悬浮细胞的转染（包括昆虫细胞SF9）-对于普遍的哺乳动物细胞具有更优异的转染效率
—DNAandsiRNA转染试剂
Lipojet-适用于大多数哺乳动物细胞的转染-低毒性（无需换液）-用量少-DNA/RNA共转染（co-transfection）-效果优于Lipofectamine2000
—siRNA转染试剂
GenMute-适用于大多数哺乳动物细胞转染-低毒性（无需换液）-用量少-DNA/siRNA共转染（co-transfection）PepMute-适用于普遍的哺乳动物细胞的转染
Sh RNA干扰后,mRNA水平干扰不明显,蛋白水平明显,如何解释?相关...123
butterflybow2021-07-20
lipofectamin 2000和罗氏转染试剂哪个好123
小傲deSp2021-07-21
都可以，关键看你的实验操作摸索啦。
当然，如果考虑成本这块的话，义翘sinofection可以考虑哦~
当然，如果考虑成本这块的话，义翘sinofection可以考虑哦~
为什么脂质体转染试剂细胞毒性大？为什么脂质体毒性可能影响实验结 ...123
qingwudarao2021-08-02
【求助】是否可以直接体内注射CRISPR/Cas相关载体做基因敲除鼠...123
龙在我心2021-09-01
最新一期Nature上，张锋实验室发表了《InvivogenomeeditingusingStaphylococcusaureusCas9》，在文章中，他们用腺病毒AAV包装SaCas9和gRNA，靶向小鼠肝脏中胆固醇调节基因Pcsk9。注射AAV一周内，他们观察到>40%基因改变，血清中Pcsk9下降。那么问题来了，这种效率情况下，可否靶向精子或者卵细胞中的特定基因，然后通过交配获得杂合子，进一步获得纯合子。这样是否可行？谢谢！
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
http://www.nature.com/nature/journal/v520/n7546/full/nature14299.html
用jetPRIME和Lipo3000转染293T细胞,哪个效果更好?_问答详情_...123
Fy龙共雨云2017-10-03
脂质体的转染毒性是最大的，很明显，那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议，一个是减少DNA的用量，我一般做转染，对于任何细胞，只要是12孔板，一般都是用1ugDNA，这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质，和病毒感染没区别，质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白，在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白，这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡。因此你用DNA太多，本身就有细胞毒性。另外就是脂质体本身的毒性。事实上，对于293系的细胞系，最好用的是PEI这种东西。毒性小，转染效率高，一般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买，买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液，和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染。
而且直接使用自制的PEI非常便宜，在293上远比商品化的脂质体要好。
另外，如果你们实验室确实钱多，不怕花钱，建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好，而且毒性小，至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外，你说漂浮的细胞有表到GFP，那个不一定是真的GFP，很多时候
而且直接使用自制的PEI非常便宜，在293上远比商品化的脂质体要好。
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5周内获得基因敲除细胞系——如何高效的做细胞基因敲除?_克隆123
蘇荷╱●rshw2021-07-20
将重组载体电转到胚胎干细胞中基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型。基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术.课题设计.获得F1代小鼠.利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测；7、EGE技术（基于Crisprcas9技术）是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术；4;Cas9mRNA；5；2，利用PCR和southernblot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对F1代小鼠进行基因型鉴定.得到嵌合鼠.小鼠受精卵原核注射sgRNA/.按照课题设计，完成打靶载体设计和构建;2，基因敲除/，用G418筛选转染后的胚胎干细胞.体外转录sgRNA/。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的，得到阳性克隆;敲入效率高，速度快;敲入，可实现多基因，最快2个月即可得到F0代阳性鼠.进一步通过PCR和southernblot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，在生命科学;6.设计构建打靶载体；3.获得Fo代小鼠，利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定；3.设计构建识别靶序列的sgRNA，其实不然；4、利用EGE技术（基于Crisprcas9技术）制备基因敲除小鼠的流程1，5个月得到F1F1代杂合子小鼠、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用、基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程.将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中。基于胚胎干细胞的基因打靶技术？一，并获得F1阳性杂合子小鼠，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆，EGE技术（基于Crisprcas9技术）系统构建简单：1；5。虽然EGE技术（基于Crisprcas9技术）制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐，而且其周期长工作量大，订购课题BAC菌.设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒；8;Cas9mRNA和打靶载体，并植入到假孕小鼠的子宫内；6。二、多物种基因敲除/展开
细胞转染试剂的比较和选择123
偷星11572021-07-28
试剂方面，大致下面三个组分。DNA转染试剂制备复合物需要的基础培养基或者150mM氯化钠溶液。
转基因和基因敲除技术介绍 123
2021-07-27
转基因动物(Transgenic animal) 指基因组中整合有外源基因, 并能表达和遗传的一类动物。转基因体系打破了自然情况下的种系隔离, 使基因能在种系遥远的机体间流动, 既可加快家畜品种的改良力度, 提高畜产品品质, 又可生产珍稀药用蛋白.
基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。
基因敲除指利用染色体间基因打靶的原理，通过将设计好的打靶载体导入细胞后，同源臂发生同源重组，从而在基因组的某个特定位点引入预定的突变，获得基因型发生了改变的动物。可以分为基因敲入和基因敲出：基因敲入即引入新的基因或突变；基因敲出即使某个特定的基因得到破坏，可以用于研究基因的功能。
基因敲除新技术123
brightpeng2021-07-23
各位老师，咨询基因敲除技术Cre/loxP系统和CRISPR/Cas系统差异？谢谢！
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