纯化DNA实验一基因组DNA的快速纯化
| 试剂、试剂盒 | 尾部缓冲液蛋白酶K 仪器、耗材 | 离心管玻璃棒 实验步骤 | 第1天 1.大约1.5cm长的尾部活检样品放在一个1.5ml盛有0.7ml尾部缓冲液的小离心管中，加35μl10mg/ml蛋白酶K，在55℃振摇温育过夜。 尾部缓冲液（配25ml） 50mmol/LTris，pH8 1.25ml1mol/LTris，pH8 100mmol/LEDTA，pH8 5ml0.5mol/LEDTA，pH8 100mmol/LNaCI 0.5ml5mol/LNaCI 1%SDS 1.25ml20%SDS 存放于室温。 蛋白酶K：10mg/ml水溶液，贮存于-20℃。 第2天 2.加7μl10mg/mlRNA酶（不含DNA酶），在37℃孵育1~2小时。 3.在微量离心机中对样品离心20分钟以沉淀鼠毛。 4.小心转移0.5ml上清，注意不要搅动沉淀。 5.在管子中加0.5ml异丙醇并通过翻转轻轻地进行混合。应该立即有线状沉淀形成。 不要剧烈混合。不要使DNA形成紧密团块，否则会难以绕缠。 6.在Bunsen灯的火焰上加热封闭100μl玻璃小吸管的末端。 7.把末端封闭的小吸管浸到DNA溶液中并剧烈搅拌来缠绕DNA。一直搅动吸管直到DNA紧紧地缠绕到上面。 8.洗DNA是在三个顺序排列的盛大约50ml乙醇的烧杯中各浸10次（1个是70%乙醇，另2个是100%乙醇）。洗5~8个样品后换洗涤溶液。 9.用一片胶带标记玻棒末端，把它插在（DNA端朝上）一块橡皮泥，使风干10~15分钟。 10.用钻石记号笔在黏附了DNA的那一末端刻线，弄断玻棒，把带DNA的那段放到已作标记的微量离心管中。 11.加0.5mlTE(pH8)。样品在室温下振荡过夜。 第3天 12.稍稍振荡管子，用干净镊子拿掉玻璃棒（在不同样品的操作之间烧一下镊子）：继续振摇1~2小时。（如果样品只是用来进行PCR分析，玻棒可以留在管子里）。 13.以1:10稀释样品，测OD260值以确定浓度（1OD260=50μg/ml). 14.DNA贮存在4℃。 |
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发布于 ： 2021-07-27
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