用于 PCR 的模板 DNA 制备实验一酚氯仿法提取石蜡组织中 DNA
| 实验方法原理 | |
|---|---|
| 实验步骤 | 1.10mm厚石蜡切片10～15张，置入消毒后的1.5mlEppendorf管中。 2.脱蜡二甲苯1200μl，9000r/min，8min×3。 3.脱水无水乙醇1200μl，9000r/min，5min×3。 4.打开Eppendorf管盖子，将其置于37℃烤箱中干燥1～2h。 5.加裂解液100μl，混匀后加20mg/ml蛋白酶K15～20μl，终浓度10μg/ml间隔振荡，55℃烤箱中过夜。 裂解液配制：1mol/LTris-HCl（pH8.0）2μl，0.5mol/L（pH8.0）EDTA4μl，10％SDS（pH7.2）20μl，加水至100μl。 6.观察裂解液是否清亮，如不清亮，根据组织量补加蛋白酶K3～5μl，继续消化至裂解液清亮。 7.加500μlTris饱和酚，混合至乳状。 8.10000r/min离心10min，小心吸取上清液。 9.加酚和氯仿各250μl，混匀，10000r/min离心5min，小心吸取上清液。 10.加氯仿500μl，混匀，10000r/min离心5min，取上清液。 11.加NaAc（乙酸钠，3mol/L，pH6.0）70μl，无水乙醇700μl，混匀，-20℃保存2h。 12.10000r/min离心5min，弃上清液。 13.加70％乙醇1ml，混匀，清洗。 14.10000r/min离心3min，弃上清液。 15.开盖，倒置Eppendorf管，室温下干燥。 |
| 注意事项 | |
| 其他 |
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发布于 ： 2021-08-19
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