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Calbiotech/H. Pylori IgA ELISA/96 Tests (12x8 breakable strip wells)/HP014A
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| Catalog number | HP014A |
| Product type | ELISA |
| Quantity | 96 Tests (12x8 breakable strip wells) |
| Sample volume | 10 µl/well |
| Species | Human |
| Storage and Stability | Product should be stored at 2-8 °C. |
| Precautions | For research use only. Not for use in diagnostic procedures. |
| References | 1. Cutler AF; Prasad VM; Santogade P. Four-year trends in Helicobacter pylori IgG serology following successful eradication. Am J Med 1998;105(1):18-20 2. Holtmann G; Talley NJ; Mitchell H; Hazell S. Antibody response to specific H. pylori antigens in functional dyspepsia, duodenal ulcer disease, and health. Am J Gastroenterol 1998; 93(8):1222-7. 3. Parsonnet J; Replogle M; Yang S; Hiatt R. Seroprevalence of CagA-positive strains among Helicobacter pylori-infected, healthy young adults. J Infect Dis 1997;175(5):1240-2. 4. Klaamas K; Held M; Wadstr¨om T; Lipping A; Kurtenkov O. IgG immune response to Helicobacter pylori antigens in patients with gastric cancer as defined by ELISA and immunoblotting. Int J Cancer 1996; 67(1):1-5. 5. Matsukura N; Onda M; Tokunaga A; Kato S; Yoshiyuki T; Hasegawa H; Yamashita K; Tomtitchong P; Hayashi A. Role of Helicobacter pylori infection in perforation of peptic ulcer: an age- and gender-matched case-control study. J Clin Gastroenterol 1997;10:S235-9. |
H. Pylori IgA ELISA Package InsertType : PDF
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H. Pylori IgG ELISA
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H. Pylori IgM ELISA
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2018-12-26
When isolating RNA, it helps to have a rough idea of how much total or poly(A) RNA can be recovered from a given amount of tissue or cells. It is also benefici 查看更多
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2021-08-13
原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。 查看更多
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蛋白质的性质是多种多样的，这使得使用平行方法表达和纯化蛋白质具有挑战性。平行方法尤其可以应用在需要一种目标蛋白质的多种衍生物，以及需要多个同系物时。典 型的方案包括对目标的评价、目标的克隆和诱变、表达筛选、大规模的表达和纯化，以及对所产生蛋白质的分析和生物物理测试。本章介绍了一些用于平行蛋白质表达和纯化的策略及方法。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」 查看更多
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2021-08-24
在生物大分子纯化分析特别是蛋白质纯化分析中，色谱是非常重要而且常用的一种技术。 一、凝胶过滤 凝胶过滤又叫分子筛色谱，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 查看更多
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2021-08-15
原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。 查看更多
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2021-09-13
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2021-07-30
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可从各种样品中提取 RNA，且产量和质量非常稳定。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2021-08-07
虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点，但并不推荐使用 poly(A)+RNA，因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸，并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2018-12-26
We routinely produce dsRNA by in vitro transcription of a PCR generated DNA template containing the T7 promoter sequence on both ends (I. Primer Designed dsRNA 查看更多
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2018-12-26
6-Well Plates Bathing Prepare dsRNA suspended in water.We use ~500 bp dsRNA. Add ~10-30 µg dsRNA to wells of 6-well tissue culture plate.We use 0.1-0.3 & 查看更多
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2021-07-22
核酸是多聚阴离子的水溶性化合物，可以与许多1价、2价离子结合形成盐类，后者在有机溶剂中不溶解也不变性．在较低温度下形成沉淀．本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导 查看更多
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2021-09-06
我先说我有的质粒和菌株：PPIC9K，PPIC9，PPICZahphaA，B，C以及一个改造的PPIC9K载体，EcoRI和BamHI双酶切，C末端引入了一个6histag菌株：GS115，KM71，X33，以及十几个空载体对照菌株我的酵母表达Protocol：>10ug质粒用Sal线性化，加1/10体积的3M 查看更多
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《rna干扰》ppt课件123
zkk4042021-08-02
我自己看了几十篇文献后做的。应用方面主要是病毒学，有用你就顶一下。
RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
提取RNA过程中加入的各种试剂的作用_问答详情_RNA提取纯化试剂_...123
11910602822021-07-23
TRIZOL裂解细胞
氯仿萃取RNA
异丙醇沉淀RNA
酒精清洗
氯仿萃取RNA
异丙醇沉淀RNA
酒精清洗
RNA提取中各种试剂的作用 123
guojing郭晶2021-07-25
Trizol法和试剂盒提取组织中的RNA，哪个方法更可靠和精确呢？谢谢！
RNA的提取及逆转录RTPCR操作步骤 纽普生物123
猴辞糯82021-07-21
一场灾难正在悄悄的酝酿,人不知鬼不觉地来临.十四时二十八分,这个恐怖的时间,一场灭顶之灾从天而降,以四川省汶川为震中心的8.0级地震吞噬了人们美好的梦,这场地震摧毁了人们的家园,殃及了多个省市和地区,顿时,电力中断,交通瘫痪,山体崩塌,河水泛滥,灾区人民陷入了水深火热之中,汶川,这个在地图上鲜为人知的地方,人们很少谈起的地方,在一瞬间成为海内外人民关注的焦点,也就是那时,人们便发扬爱的精神,向灾区人民伸出援助之手,国务院在第一时间下达命令,派出国内的搜救精英赶往灾区,以“众志成城,抗震救灾”为口号,“时间就是生命,灾情就是命令”为主要目标,争分夺秒的抢救灾民,
如何根据实验样品选择合适的RNA提取方法：少量细胞或石蜡切片中的...123
风音46102017-10-03
1. 使用正确的细胞或组织储存条件
在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。
RNAfixer使样品储存更为便利。储存在RNAfixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。
2. 消除环境RNase的污染
为了得到完整的、高品质RNA，在整个RNA制备过程中，当RNA离开强蛋白变性剂（如离液裂解液或酚）的保护时，避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase几乎是无所不在，所以必须确保与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备，都必须用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过，去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。必须保证一直使用无RNase的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换。
3.迅速灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。
以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：
1）、用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。
2）、用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活。
3）、立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。
4. 选择合适破壁方法
细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收，酵母提取时加入破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。
5. RNA提取少走弯路——不同材料如何选择最适RNA提取试剂
现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法是柱式分离，如RNApure 因为操作简单，时间短，纯度高而受到大家的喜爱，RNApure不需要DNA酶消化DNA，节省了时间，避免RNA的降解，从而提高了产量；相对非柱式分离（如TRIzol），去除蛋白及其他杂质干净，提高了纯度，对于细胞、组织、一般植物均非常适合。植物RNA的提取比较难抉择，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白杂质、次生代谢物含量的影响，一般用TRIzol提取纯度不高，而且很多植物用TRIzol提取不出来。
这时候可以选择多糖多酚植物总RNA提取试剂盒（水仙、辣椒、胡萝卜、玉米、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取试剂盒（适合绝大多数植物提取，包括：各种中草药、植物种子、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、草坪植物、松树、杉树、白桦、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕、紫罗兰、月季、天竺蓝、牵牛花等）；非常值得一提的是血液（包括血清、血浆、脑脊液、各种拭子或其他液体含量高的样本）RNA的提取用TRIzol和红细胞裂解的方法效果都不好，因为红细胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分，这个过程RNA很容易降解，推荐使用TRIpure LS (RP1101)或者血液总RNA提取试剂盒（RP4001），该方法适用于表达谱芯片实验中RNA的提取。
6. 低浓度RNA的沉淀
纯化得到的RNA可能需要通过沉淀来浓缩，以满足一些下游应用的需要。醋酸铵(NH4OAc) 沉淀（加0.1体积的5M 醋酸铵、2-2.5体积的无水乙醇，-20°C放置25分钟以上）可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低浓度的RNA（ng/ml），可以采用共沉淀（如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA ）的方法。核酸助沉剂是linear acrylamide，当RNA用于RT-PCR分析时，线性的丙烯酰胺和DNase处理的糖原都可以作为理想的共沉淀剂，因为它们都不含DNA污染，糖原含量高会抑制PCR反应，应注意控制浓度，核酸助沉剂对PCR无影响，成为病毒核酸提取的首选。酵母RNA和未处理的糖原会给样品带来核酸污染，有可能影响RT-PCR的结果。沉淀后，注意避免RNA沉淀过分干燥，因为这可能导致很难重新溶解。
7. 提取好的RNA如何储存
如果只是短期储存，重悬的RNA应放置于-20°C；如果是长期储存的话，就应该放置于-80°C。储存RNA时，可以加入少量的RNA酶抑制剂（RP5601），避免RNA的降解，RNA可以直接做下游实验。如果要长期保存RNA，可以加入RNAlong。我们推荐将RNA溶液分装在几支管中。这会避免反复冻融损伤RNA，并预防偶然的RNase污染。
在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。
RNAfixer使样品储存更为便利。储存在RNAfixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。
2. 消除环境RNase的污染
为了得到完整的、高品质RNA，在整个RNA制备过程中，当RNA离开强蛋白变性剂（如离液裂解液或酚）的保护时，避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase几乎是无所不在，所以必须确保与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备，都必须用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过，去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。必须保证一直使用无RNase的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换。
3.迅速灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。
以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：
1）、用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。
2）、用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活。
3）、立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。
4. 选择合适破壁方法
细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收，酵母提取时加入破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。
5. RNA提取少走弯路——不同材料如何选择最适RNA提取试剂
现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法是柱式分离，如RNApure 因为操作简单，时间短，纯度高而受到大家的喜爱，RNApure不需要DNA酶消化DNA，节省了时间，避免RNA的降解，从而提高了产量；相对非柱式分离（如TRIzol），去除蛋白及其他杂质干净，提高了纯度，对于细胞、组织、一般植物均非常适合。植物RNA的提取比较难抉择，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白杂质、次生代谢物含量的影响，一般用TRIzol提取纯度不高，而且很多植物用TRIzol提取不出来。
这时候可以选择多糖多酚植物总RNA提取试剂盒（水仙、辣椒、胡萝卜、玉米、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取试剂盒（适合绝大多数植物提取，包括：各种中草药、植物种子、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、草坪植物、松树、杉树、白桦、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕、紫罗兰、月季、天竺蓝、牵牛花等）；非常值得一提的是血液（包括血清、血浆、脑脊液、各种拭子或其他液体含量高的样本）RNA的提取用TRIzol和红细胞裂解的方法效果都不好，因为红细胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分，这个过程RNA很容易降解，推荐使用TRIpure LS (RP1101)或者血液总RNA提取试剂盒（RP4001），该方法适用于表达谱芯片实验中RNA的提取。
6. 低浓度RNA的沉淀
纯化得到的RNA可能需要通过沉淀来浓缩，以满足一些下游应用的需要。醋酸铵(NH4OAc) 沉淀（加0.1体积的5M 醋酸铵、2-2.5体积的无水乙醇，-20°C放置25分钟以上）可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低浓度的RNA（ng/ml），可以采用共沉淀（如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA ）的方法。核酸助沉剂是linear acrylamide，当RNA用于RT-PCR分析时，线性的丙烯酰胺和DNase处理的糖原都可以作为理想的共沉淀剂，因为它们都不含DNA污染，糖原含量高会抑制PCR反应，应注意控制浓度，核酸助沉剂对PCR无影响，成为病毒核酸提取的首选。酵母RNA和未处理的糖原会给样品带来核酸污染，有可能影响RT-PCR的结果。沉淀后，注意避免RNA沉淀过分干燥，因为这可能导致很难重新溶解。
7. 提取好的RNA如何储存
如果只是短期储存，重悬的RNA应放置于-20°C；如果是长期储存的话，就应该放置于-80°C。储存RNA时，可以加入少量的RNA酶抑制剂（RP5601），避免RNA的降解，RNA可以直接做下游实验。如果要长期保存RNA，可以加入RNAlong。我们推荐将RNA溶液分装在几支管中。这会避免反复冻融损伤RNA，并预防偶然的RNase污染。
Rna甲基化测序文库的构建方法123
宜修2014-07-07
【求助】天根RNA提取试剂盒DP419提出的蛋白可以做WB吗 核酸...123
deadbird12021-08-04
天根RNA试剂盒DP419提取的蛋白可以做WB吗：分三层后，上层是RNA，那个中间层的蛋白怎么提出来纯化一下做WB？请高手解答，非常感谢！
【求助】关于RNA提取中的试剂 PCR技术讨论版论坛123
饼干糖果2021-07-28
我是个初学者，有很多问题。请大家指教。
1、RNA提取为什么用异丙醇，而且是等体积的？
2、为什么用氯仿，RNA为什么在上清中，中间和下层分别有什么？
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗，而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗，会使水分快速蒸发，可行吗？
谢谢大家啦，帮帮忙。
1、RNA提取为什么用异丙醇，而且是等体积的？
2、为什么用氯仿，RNA为什么在上清中，中间和下层分别有什么？
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗，而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗，会使水分快速蒸发，可行吗？
谢谢大家啦，帮帮忙。
血液总rna提取试剂盒_血液总rna提取试剂盒【价格,厂家,图片,批发,采购...123
howtostudent2021-07-30
各位兄弟姐妹，谁知道有质优价廉的血清/血清总RNA提取试剂盒嘛？（血清microRNA逆转录，定量PCR验证试验）
－－本来，看好丹麦Exiqon公司，Qiagen的两个试剂盒，无奈经费有限，这两个盒子很不错，价格也不菲，有米的兄弟姐妹可以买。
－－另外查询到国产上海诺伦公司的血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒－－广州这边用的人不多，不知道上海那边的兄弟姐妹有什么经验？
产品编号 产品名称 产品包装 价格 说明书 LN-0111A 血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒 50次 400.00元 LN-0111B 100次 720.00元
－－－还有，北京康为世纪公司的游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂，货号：CW2281，也比较便宜，但是俺心中也没有底，请大家给点意见。
－－－已经订购了LIFETECHNOLOGY的TrizolLS专门提取体液RNA的试剂（100毫升2000元人民币，也不菲），准备预试验看看提取RNA的质量。(Lifetechnology公司的AM1556也不错，但是也不便宜，每个盒子40次/2590元）
－－－－但是还是希望有试剂盒，比较简单，快捷，最重要的是样本量太大，要分离400份左右的血清。
－－本来，看好丹麦Exiqon公司，Qiagen的两个试剂盒，无奈经费有限，这两个盒子很不错，价格也不菲，有米的兄弟姐妹可以买。
－－另外查询到国产上海诺伦公司的血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒－－广州这边用的人不多，不知道上海那边的兄弟姐妹有什么经验？
－－－还有，北京康为世纪公司的游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂，货号：CW2281，也比较便宜，但是俺心中也没有底，请大家给点意见。
－－－已经订购了LIFETECHNOLOGY的TrizolLS专门提取体液RNA的试剂（100毫升2000元人民币，也不菲），准备预试验看看提取RNA的质量。(Lifetechnology公司的AM1556也不错，但是也不便宜，每个盒子40次/2590元）
－－－－但是还是希望有试剂盒，比较简单，快捷，最重要的是样本量太大，要分离400份左右的血清。
Jou讲义rnal123
忠诚的粉丝萌萌2017-10-03
尔梅洛于1998式发表论文,公布关RNA干扰机制发现发现基础,RNA干扰技术近迅速兴起,其前景普遍看RNA能够充信使,传递DNA(脱氧核糖核酸)遗传信息,其用于蛋白质产合研究显示,向物体内注入微RNA片段,干扰物体本身RNA信使功能,导致相应蛋白质合,关闭特定基科家认,采用RNA干扰技术直接源让致病基沉默,许更效治疗某些疾病 种技术初曾用研究植物蠕虫等,科家发现哺乳物细胞效例,美哈佛医院科家已经功利用RNA干扰技术治愈实验鼠肝炎目前,RNA干扰治疗技术快速进入体试验阶段些公司资助用项技术治疗黄斑变性、乙肝等疾病试验 尚几难题首先科家没找种便快捷使RNA干扰能患者体内效部位进行其科家确定种疗否影响目标基外其基引发副作
RNA提取试剂的选择 实验方法123
香粉zhby2021-07-27
RNA提取对于科研人员来说并不陌生，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上，现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要，为什么往往提取的RNA却容易失败呢？
RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？
首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差。
其次，选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时，操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚氯仿抽提等步骤，简单快捷。组织或细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。
对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点，Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等）、富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌提取高纯度的TotalRNA，适用范围广泛。按照标准流程，本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂，无需额外购买其它试剂。
OMEGArna提取试剂盒中文说明总RNA提取 123
游客随风43yO2017-10-01
E.Z.N.A. Total RNA Kit I
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
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