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【求助】关于RNA提取中的试剂
2021-07-28
问题描述:

我是个初学者,有很多问题。请大家指教。
1、RNA提取为什么用异丙醇,而且是等体积的?
2、为什么用氯仿,RNA为什么在上清中,中间和下层分别有什么?
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗,而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗,会使水分快速蒸发,可行吗?
谢谢大家啦,帮帮忙。

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外源rna酶清除剂
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rna提取,一般步骤原理都是,先裂解细胞,然后在去蛋白,脂肪,多糖等杂质。氯仿,是一种变性剂可以让蛋白变性达到去除的作用,也是一种增加溶液比重,通过离心,让溶液分层的作用。异丙醇可以容核酸。分层。上清一般为核酸溶液,中间层大多为蛋白,下层就是密度比较大脂肪等的杂质。
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zjubell
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展开引用饼干糖果我是个初学者,有很多问题。请大家指教。1、RNA提取为什么用异丙醇,而且是等体积的?2、为什么用氯仿,RNA为什么在上清中,中间和下层分别有什么?3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗,而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗,会使水分快速蒸发,可行吗?谢谢大家啦,帮帮忙。......1.异丙醇是沉淀核酸用的。不一定非得等体积。多点没关系。有机溶剂,跟水互溶,与水结合后,核酸由于不能被电离就沉淀出来了。2.为何用氯仿有点忘了。中间层是蛋白,下层是有机相应该是DNA。站内搜索一个‘雾都孤儿’的贴,写的很详细,很不错的。3.用75%乙醇洗是由于RNA中还有很多盐离子,用75%能溶解其中的离子,如果是100%的乙醇,则没啥意义,离子洗不掉,就不叫洗了。用75%的洗了之后用无水的再洗可以加速蒸发。
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GSS0517
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LS正解。2.氯仿可是蛋白变性,且比水重,离心后在最下层,里面主要含有蛋白。上层是水相,里面含有RNA和少量的DNA,中间层是DNA。因为RNA和DNA的溶解度不同,因此RNA在上层水相,DNA在中间层
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