各级分蔗糖酶活性测定 及纯化率的计算实验一考马斯亮蓝法
| 实验方法原理 | 用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度,本实验中,蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5min，产生1毫克葡萄糖所需酶量。 用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,比活力为每毫克蛋白质的活力单位数。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 蛋白质 试剂、试剂盒 | 乙酸缓冲液葡萄糖蔗糖二硝基水杨酸 仪器、耗材 | 分光光度计水浴锅试管保鲜膜 实验步骤 | 1. 各级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活性测定 用0.02mol/L,pH4.9乙酸缓冲液(也可以用pH5～6的去离子水代替)稀释各级分酶液,测出酶活合适的稀释倍数: Ⅰ:1000～10000倍 Ⅱ:1000～10000倍 Ⅲ:100～1000倍 以上稀释倍数仅供参考。 按“表1”的顺序在试管中加入各试剂,进行测定,为简化操作可取消保鲜膜封口,沸水浴加热改为用90～95℃水浴加热8～10min。 表1级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的酶活力测定  以5min生成的还原糖的毫克数为纵坐标,以试管中1ml反应混合物中的酶浓度(mg蛋白/ml)为横坐标,画出反应速度与酶浓度的关系曲线。 2. 计算各级分的比活力、纯化倍数及回收率 蛋白质含量测定同蛋白质系列实验三。为了测定和计算下面纯化表中的各项数据,对各个级分都必须取样,每取一次样,对于下一级分来说会损失一部分量,因而要对下一个级分的体积进行校正,以使回收率的计算不致受到不利的影响。 酶的纯化表如下:
下面是对假定的各级分记录体积进行校正计算的方法和结果:  |
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发布于 ： 2021-07-15
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