醋酸钠乙醇沉淀法核酸纯化实验
| 实验方法原理 | 核酸是多聚阴离子的水溶性化合物，可以与许多1价、2价离子结合形成盐类，后者在有机溶剂中不溶解也不变性．在较低温度下形成沉淀． | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 待纯化样本 试剂、试剂盒 | 醋酸钠缓冲液无水乙醇70%乙醇 实验步骤 | 实验试剂： 1.3mol／L醋酸钠缓冲液，pH5.2：称取醋酸钠（NaAC·3H20）408.1g，由于800ml水中，用冰醋酸调节至pH5.2，加重蒸馏水至1000ml．分装后高压灭菌（以下称3mol/L醋酸钠缓冲液）． 2．无水乙醇及70％（V／V）乙醇． 实验操作： 1.将含核酸的溶液用移液器转至一新的Eppendorf离心管，同时测量合算溶液的体积． 2.加入1／10体积的3mol／L醋酸钠缓冲液。使醋酸钠的终浓度为0.3mo1/L． 3.下颠倒混匀后，准确加入2倍体积（RNA为2.5倍体积）的预冷无水乙醇，颠倒混匀，置冰浴中15－30min或一20℃30min。 4.4℃12000r／min，离心15min． 5.手持Eppendorf成45度角，使核酸沉淀面向上，用微量移液器或连接真空泵的吸头不可接触沉淀物． 6.向管中加入预冷的70%乙醇至2／3体积．混匀漂洗，以除去残余的盐． 7.4℃12000r／min离心2min，如步骤5吸取上清液． 8.不盖管盖置室温10－l5min或真空中2min，使乙醇挥发。 |
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发布于 ： 2021-07-22
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