BayoubiolabsBiochemicalsCatalogThelowestcostperloADIngDNAladdersintheworldSeetheladdersummarychartbelow.DNALaddersforconventionalelectrophoresis20bpDNAladder50bpDNAladder100bpDNAladder200bpDNAladder500bpDNAladder1kilobaseDNAladderSupercoiledPlasmidladderVectorspUCandM13DNAReadytoLigateVectorsReadytoLigatepUC18andM13mp18MolecularBIOLOGyKitsSupercoil-It™PlasmidPurificationKitExonuclease-It™PlasmidPurificationKitRepair-It™DNARepairKitRecombinantEnzymesRecombinantEnzymes
LowestCostperLoadingintheWorld:only60centsperloading,byfartheleastexpensiveintheindustry25BluntEndedBandsat20bpto500bpin20bpincrements.Thebandsareallbluntended,avoidinganyartifactscausedbybandreannealing.Bothpolyacrylamidegelelectrophoresisanda3%Metaphorgelresolvebandsfrom20bpto500bp.Allbandsonpolyacrylamideareverysharp.ThelowerbandsontheMetaphorgelwillappearslightlydiffuseduetothepoorerresolvingcapABIlityofMetaphorforverysmallfragments.Polyacrylamideprovides250loadingspertube,Metaphorprovides125loadingspertube.HighIntensityBandat100bpforeasybandidentificationIdealforaccuratelysizingsmallerPCRproductsandsmallsizedrestrictiondigestsSuppliedasa500ulstocksolutioninTEbuffer,whichissufficientfor250loadingsforpolyacrylamidegelsor125loadingsforMetaphorgels.Anadditionaltube,labeledas"WorkingSolution",issuppliedformakingconvenientinstantuseworkingsolutions.Theenclosedproductinformationsheetinstructshowtomixtheworkingsolution.
我们生产高质量,低成本的动物和体外应用质粒。我们不生产供人类使用的质粒。我们不生产用于产生供人类使用的病毒的质粒(例如腺病毒、逆转录病毒和任何其他病毒)。经验:我们从1996年开始提供定制的质粒制备服务。我们有大量生产各种类型和大小质粒的经验。我们经常向制药和基因治疗行业的客户提供散装质粒。我们的服务是完全保密的。你只提供给我们一个小样本(1微克)你的质粒或在大肠杆菌宿主质粒。剩下的我们来做。四秤:我们提供五秤-8升,16升,32升,100升和400升。对于8升、16升和32升的天平,细菌宿主生长在摇瓶中。对于100升和400升的天平,细菌寄主生长在工业发酵罐中。在更大范围内,每升的服务成本大幅下降。产量:我们的质粒产量通常是在LB肉汤中生长的制剂产量的两倍。我们使用专有的丰富的肉汤配方,以实现这一较高的产量。基于pUC的质粒的典型产量为每升10到15毫克。我们通常会获得更高的收益。我们的最高产量是每公升32毫克。我们8升和16升的平均产量分别为100毫克和200毫克。100升刻度的产量在1-2克之间。产量高度依赖于单个质粒。根据客户的要求,我们可以在大规模发酵之前获得估计的质粒产量。如果对客户而言,质粒的估计产量低得不可接受,客户可以免费取消制备。质粒质量:该质粒是由我们自己专有的质粒制备工艺制备的。该质粒的生物活性与桥根质粒相似。质粒通常大于90%的超螺旋。最终的质粒产物内毒素、RNA、蛋白质、RNase、DNase、核苷酸和核苷污染较低。质粒不暴露于紫外线或诱变溴化乙锭,确保最大的生物活性。超螺旋纯化:我们是世界上唯一一家提供最高纯度超螺旋纯化质粒的公司。在超螺旋纯化过程中,我们去除了大部分有缺口的质粒和大部分残留的染色体DNA污染。我们可以在任何刻度上执行此过程-从8升到400升或更高。超冷净化工艺效率高。在这个过程中,只有不到5%的超螺旋质粒丢失。最终的质粒产物通常大于99%的超螺旋。此过程是专有的。超螺旋纯化是可选的。点击这里查看凝胶照片中的超螺旋纯化示例。缓冲液选择:最终的质粒产物通常作为干颗粒提供。或者,质粒可以在任何缓冲液中以客户要求的任何浓度供应。质量控制:用琼脂糖凝胶电泳对最终的质粒产物进行检测,以确定质粒的大小和纯度。所述质粒产物具有包括总产率、质粒浓度、Abs260/Abs280比值和凝胶照片的数据表。快速服务:8升和16升刻度的一周周转时间。100升刻度的两周周转时间。最终的质粒产品由客户承担费用,在一夜之间发货,通常总共大约30美元。保证:巴渝生物实验室生产的质粒材料在性质上是实验性的,按原样提供给客户,不作任何适销性或特定用途的适用性保证,也不作任何其他明示或暗示的保证
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RNA聚合酶的作用位点:3'-5'-磷酸二酯键
DNA解旋酶的作用位点:DNA中互补碱基之间的氢键
2、异硫氰酸胍:目前认为是最有效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活,它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用。
3、氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,它和RNA酶结合形式过渡类物质,几乎能完全抑制RNA酶的活性。
4、RNA酶的蛋白质抑制剂(RNasin):从大鼠肝或人胚盘中提取得来的酸性糖蛋白.Rnasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂,可以和多种RNA酶结合,使其失活。
5、其他:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定的抑制作用。
不过这种类似的RNA酶清除剂是一种广泛的蛋白灭活剂,如果你配置处理的溶液要用于类似一些酶蛋白的溶液体系,那就不可以用RNA酶清除剂来处理了,否则会影响需要用到的酶的活性
有DNase、RNase、核酸酶S1等,可水解相应的DNA和RNA,核酸酶S1可降解单链DNA和RNA,用量增大也可降解双链核酸。它可用于切去ds-cDNA合成中产生的发夹环。
(2)修饰酶
有些酶可在其他酶的作用下,将酶的结构进行共价修饰,使该酶活性发生改变,
核酶的催化功能与其空间结构有密切关系。
不同的核酶可分为两类:
1 剪切型核酶:只剪不接,如M1 RNA。
2 剪接型核酶:该酶具有序列特异的内切核酸酶、RNA连接酶等多种酶活性。
加工场所在生物体细胞质(或相关实验设备中)。
转录后修饰在生命体中广泛存在(已发现100多种),而假尿嘧啶RNA修饰就是其中最主要的一种。假尿嘧啶在多种非编码RNA(tRNA、rRNA、snRNA等)上的功能与机制已有较多研究;然而,对于信使RNA(messengerRNA,mRNA)上假尿嘧啶的分布和潜在生物学功能,目前知之甚少。最主要的难题,就是如何实现假尿嘧啶在mRNA上的精准定位。
为了研究哺乳动物转录组中的假尿嘧啶修饰,伊成器课题组首先利用高分辨质谱对mRNA中的假尿嘧啶修饰进行定量,发现其广泛存在于各种细胞系及小鼠的组织当中,并且在哺乳动物mRNA中丰度相当高。该研究继而通过化学生物学、高通量测序等手段,发展了“CeU-Seq”—一种利用小分子化合物实现特异性标记与富集的假尿嘧啶高通量测序技术。利用这一技术,该研究成功实现了人细胞系以及小鼠(大脑与肝脏组织)全转录组水平的单碱基分辨率假尿嘧啶检测,发现在数千个mRNA与长非编码RNA(lncRNA)上都含有假尿嘧啶修饰。该研究进一步确定了多个可以作用于mRNA上的假尿嘧啶合成酶(其中PUS1、DKC1两种酶之前被发现与线粒体肌病、先天性角化不良等人类疾病相关),并且发现转录组中假尿嘧啶的含量与分布均会受到各种环境刺激的调控,呈现出“刺激条件特异性”的诱导修饰。因此,该研究不但揭示了假尿嘧啶的广泛存在、绘制了转录组中假尿嘧啶RNA修饰的高清谱图,也为这一转录后修饰参与基因表达调控的研究提供了重要工具、为近年来兴起的“RNA表观遗传学”领域提供了崭新的研究方向。
北京大学生科院博士生李笑雨(PTN-BBS联合培养项目)、生命中心博士生朱平、博士生马士清是这篇论文的并列第一作者,生命科学学院伊成器研究员是该论文的通讯作者。该研究得到了国家自然科学基金、科技部973计划和北大清华生命科学联合中心的资助。
原文链接:http://www.nature.com/nchembio/journal/vaop/ncurrent/full/nchembio.1836.html
详情:http://www.bioku.cn/201212/science-cirp-circADIan-gene-clip-posttranscriptional-modification-fibroblast/
在哺乳动物组织中,节律基因的表达受到局部的振荡器或视交叉上核中生物钟主钟控制的系统信号的调控。本研究发现是受刺激的体温循环而不是外周振荡器,控制纤维母细胞中的冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的节律性表达。反过来,功能缺失性实验表明CIRP是高振幅的节奏基因表达所需的。利用基于生物素-链亲和素的交联和免疫沉淀反应(CLIP),本研究对CIRP结合的RNA进行了全转录组分析,发现了一些编码昼夜节律振荡器蛋白的转录物,包括CLOCK蛋白。此外,在CIRP缺失的纤维母细胞中,CLOCK的含量大大减少。因为在这些细胞中,CLOCK的异位表达提高了节律基因的表达水平,因此我们猜测CIRP通过调节CLOCK的表达水平赋予了昼夜节奏振荡器的健壮性。
比如用QIAGEN的RNase-free的DNase处理的,不是加了DNase就结束了,为了去除DNase(蛋白)和buffer等可能影响到后期操作的因素,所以酶解了DNA后必须纯化RNA(QIAGEN的纯化柱),这样得到的RNA才用于定量实验。即使这样,在做real-time PCR时都要加一管仅加RNA的作为阴性对照(排除DNA的污染)。
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