【求助】请问,用T4连接酶连接以后,做转化时,还需要酒精沉淀吗?
2008-06-16
问题描述:
请问,用T4连接酶连接以后,做转化时是否需要酒精纯化一下?还有一个问题,用T4聚合酶补平粘性末端以后,可以直接用来做连接吗?
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yangchunzhang1
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我一般都是连接后直接用反应溶液进行转化的。转化大肠杆菌时只要有50ng质粒转入细菌即可完成成功克隆,因而不必为此再次纯化。乙醇沉淀后反而损失很大,不一定能保证转化结果了。
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loneman
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直接转化就行了。
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PULCH
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如果是电转化,就必须纯化;如果是化学转化,无需纯化。
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gringoire
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我电转放2ul也不需要纯化,如果再多就需要了,否则会有电火花
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lihui20021303
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粘性末端补平以后,要做连接,还需要纯化吗?可不可以直接用补平的反应液来做连接哪?
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