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在使用NEB的T4DNA连接酶,遇到些问题
2021-07-27
问题描述:

在使用NEB的T4DNA连接酶,想请问一下平末端连接的体系和反应温度、时间,因为之前用了10微升的体系,2微升buffer,1微升载体,6微升目的片段,1微升T4连接酶,没成功,有用过的同志们帮帮忙。

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mpark
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Your ligation is fine. How do you determine the ligation is failed?
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YE15797670729
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mparkYourligationisfine.Howdoyoudeterminetheligationisfailed?我后面将连接产物转化带了DH5a的感受态细胞中,然后在含抗生素的LB培养基上凃板,但是没有长出来。我问了周围的同学,他说我做的平末端,那个体系是黏性末端的体系,所以我已经调整体系重新再做了。
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