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Lucigen/NxGen® phi29 DNA Polymerase/30221-2/10,000 U
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NxGen Enzymes Iconphi29DNAPolymeraseisahighlyprocessiveDNApolymerasewithapowerfulstranddisplacementactivityanda3′→5′proofreADIngexonucleasefunction.Theenzymeiscapableofupto70,000insertionsperbindingevent.

 

phi29 Price Comparison
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Specifications

UnitDefinition:1unitisdefinedastheamountofpolymeraserequiredtoconvert0.5pmolofdNTP"sintoacidinsolublematerialin10minutesat30°C.

Source:ArecombinantE.colistraincarryingthephi29DNAPolymerasegenefrombacteriophagephi29.

UnitConcentration10,000U/mL
Purity(SDS-PAGE)>99%
SSExonucleaseFunctional
E.coli16SrDNAContamination100U<10copies
Endonuclease100U<10%converted
Storage-20&°C

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Suppliedat10,000U/mLin10mMTris-HCl,100mMKCl,0.1mMEDTA,1mMdithiothreitol,0.5%Tween-20,0.5%NP-40,50%glycerol,pH7.4@25°C.Alsosuppliedis10Xphi29DNAPolymeraseBuffercomposedof500mMTris-HCl,100mM(NH4)2SO4,40mMDithiothreitol,100mMMgCl2,pH7.5@25°C.10,000Uissuppliedas5×2,000U.

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T4 DNA Ligase(T4 DNA 连接酶) 催化粘性末端或平末端两条DNA 链的相邻核苷酸的5`- 磷酸基和3`-OH 的连接。该酶也可催化RNA 与双链DNA 或RNA 的连接,但不能使单链核酸相连。 特点:提供高浓度产品:Cat.# M1794 包含500 单位10–20u/μl 的T4DNA Ligase。 灵活:可用于5`、3` 或平末端DNA 插入片段。 提供10× 反应缓冲液:300mM Tris-HCl (pH 7.8,25℃ ),100mM MgCl2,100mM DTT 查看更多>
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链3‘-OH末端和,另一DNA链的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。... 查看更多>
T4 DNA连接酶(T4 DNAligase)产品介绍及价格链接请点击T4 DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可连接双链DNA的平末端、互补粘性末端及其中的单链切口,也能催化RNA连接到DNA或者双链RNA上,但不催化单链核酸的连接。必拓生物采用先进技术研制出高纯度、高品质的T4 DNA连接酶,媲美TaKaRa、NEB产品。必拓®T4... 查看更多>
特性 高反应效率 粘性末端和平齐末端均可连接 限制性酶切片段的克隆 将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端 室温或 16℃ 均有活性 概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1) 。 来源纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8(2) 。 反应条件1 查看更多>
3.6.1 用 T4 DNA连接酶连接RNA分子的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接,其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。 查看更多>
所有产品都有正品保障,透析袋现货,为美国spectrumlabs、viskase、cellu.sep三大公司生产。 T4 DNA 连接酶 货号 规格 价格 库存 #M0202L 100,000 units 3,029... 查看更多>
2018年7月19日-...Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Sci... 查看更多>
AssayBiotech CUSABIO Immunoway Santa Abcam Cst jackson Pierce Sigma Amresco Qiagen Cayman abnova millipore invitrogen merk ebioscience prosp... 查看更多>
特性 连接单链 RNA 和 DNA 用 5 -[32P] pCp 进行 RNA 3末端标记 RNA 和 DNA 分子内及分子间的连接 合成单链寡脱氧核苷酸 蛋白质中掺入非天然氨基酸 概述催化 3→5 磷酸二酯键的形成,使核苷酸的5 -磷酸末端和 3-羟基末端连接。伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi 作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸(1)。 来源携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E.coli 菌株。 反应条件1X T4 RNA 连接酶缓冲液[50 查看更多>
连接酶链反应(Ligase Chain Reaction,LCR)是继PCR后,新出现的一种更加完善的DNA体外扩增和检测技术。在检测点突变等方面具有独特的优点。... 查看更多>
上海宝曼生物科技有限公司在发布的T4 DNA连接酶供应信息,浏览与T4 DNA连接酶相关的产品或在搜索更多与T4 DNA连接酶相关的内容。 查看更多>
特性 耐热性好 可在 PCR 和连接酶链式反应过程中掺入磷酸化寡核苷酸 可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测(1,3) 可通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变(4) 概述Taq DNA 连接酶能够催化磷酸二酯键的形成,使杂交到同一互补靶 DNA 链上的两条契合寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键连接。这个连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此,可以用它来检测单碱基替换。在 4 查看更多>
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不要机理就像看下连接前的3'和5'什么样子内切酶切开后两头都要做去磷酸化吗? 谢谢
T4DNA连接酶 123
曾小峰2021-07-21
各位大侠,我的目的基因大约1.7KB,载体大约4.7KB,做了几次连接实验均为成功,不知哪个公司的T4连接酶的连接效率较高.请大家帮忙,我很急.
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的.

DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
请问,用T4连接酶连接以后,做转化时是否需要酒精纯化一下?还有一个问题,用T4聚合酶补平粘性末端以后,可以直接用来做连接吗?

求有经验的大神指教,我的载体和目的基因连不上,转化不到大肠中,比例为1:3。另外,为啥胶回收后的载体浓度那么低,大约6ng/ul了,影响连接么?

它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。
连接酶有T4噬菌体DNA连接酶、T4噬菌体RNA连接酶、大肠埃希菌DNA连接酶等。DNA连接酶可连接平端,也连接粘端。反应需有Mg2+和ATP存在,pH7.5-7.6。最适温度37℃,30℃以下活性明显下降,但考虑到被连接DNa 的稳定性和粘性末端的退火温度,一般平端连接用20-25℃,粘端连接用12℃左右。
聚合酶有DNA聚合酶(以DNA为模板合成DNA大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ,大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow大片段),T4或T7噬菌体DNA聚合酶等);RNA聚合酶(以DNA为模板合成RNA,T7或T3噬菌体RNA聚合酶);逆转录酶(以RNA为模板合成DNA,除RNA病毒中发现外,发现大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ和Taq DNA聚合酶都有逆转录活性)。
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′,3′→5′外切酶活性。Klenow片段是DNA聚合酶Ⅰ被枯草杆菌酶作用产生的一个大片段,有5′→3′聚合酶和3′→5′外切酶活性,无5′→3′外切酶活性。可用于缺口翻译(Nick translation)法标记核酸,也可用于DNA序列测定,修补DNA链等。向左转|向右转

菌体构建时,目的基因连接在T载体上,测序也正确,但是将目的基因还有载体分别双酶切后总是连接不上,将连接后产物跑核酸胶,什么也没有,不知道是什么原因?我的目的基因浓度为9ng/ul,载体回收后的浓度为6ng/ul,是因为浓度太低的原因吗?还有就是连接有目的基因的T载体双酶切后出现了三条带,这个又是什么原因呢?希望得到解答

DNA的复制事实上是半不连续复制 即只有一条链的合成是连续的 这听起来很神奇 但确实是这样 连续合成的链叫做前导链 另一条链称为后随链 它的合成是不连续的 以它为模板的合成 需要一段一段地进行 所合成的片段叫做冈崎片段
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
所有的DNA连接酶都具有专一性
酶对所作用的底物有严格的选择性。一种酶仅能作用于一种物质,或一类分子结构相似的物质,促其进行一定的化学反应,产生一定的反应产物,这种选择性作用称为酶的专一性。
现有DNA双链,其中一条有缺口,用T4DNA连接酶封闭缺口反应体系是什么?连接酶浓度有什么要求?

大家有用过Invitrogen的T4连接酶吗?说明书上是23-26度连接,一般的连接酶不都是16度吗?应该用多少度呢?另外,说明书上还说连接后为了达到更好的转化效率,应将连接反应液至少稀释5倍再转化,是这样吗?谢谢大家帮忙啊
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