请使用支持JavaScript的浏览器! 【求助】提取的RNA,DNA酶消化1小时为何还能扩出目的片段?_蚂蚁淘商城
【求助】提取的RNA,DNA酶消化1小时为何还能扩出目的片段?
2007-06-08
问题描述:

本人提取的RNA,准备反转录做Real-timePCR.由于引物不跨越内含子,所以为了排除基因组DNA的污染.先用DNA酶消化,可是消化了1小时,阳性对照的DNA(PCR产物)消化后跑电泳都看不到带了,说明DNA酶好使啊.可是为何消化后的RNA还能扩出目的片段呢?还有痕量的残留?????
郁闷啊,
也许如mxBDna2003所说:"TAQ(除了具有DNA指导的)还有RNA指导的DNA聚合酶功能,所以是可以直接从RNA中P出来的!"


看了园子里不少关于这类的帖子,RT时被DNA困扰的人还真不少啊------烦请高手指点.大家讨论.

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leukocyte
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自己顶!!!
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0571yezi
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楼上的在提什么的RNA,我在提细菌RNA时也出现这种情况的
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leukocyte
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我提的是培养的细胞的RNA
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flydusty
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我细菌RNA做RT时,也出现总RNA为模板能够PCR出目的条带
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flydusty
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不知道后来问题解决了吗
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yaoshan
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我一般做两次DNaseI处理。基本没有问题,能处理干净。1ug的模板DNaseI用量为1U,一次DNaseI处理,用量不能超过5U。否则酶抽提不干净。
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cyw821030
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DNA根本无法除净
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