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EnGen®SpydCas9isaninactivemutantofCas9nucleasethatretainsprogrammableDNAbindingactivity(1,2).EnGenSpydCas9containstwopointmutations,D10AandH840A,whichinactivateitsRuvCandHNHnucleasedomains,respectively.TheN-terminalSNAP-tag®allowsforcovalentattachmentoffluorophores,biotin,andanumberofotherconjugatesusefulforvisualizationandtargetenrichment.LikewithCas9nuclease,DNAbindingbyEnGenSpydCas9requiresaguideRNAcomplementarytoatargetsequencewithaprotospaceradjacentmotif(PAM),NGG,downstreamofthetargetsequence.EnGenSpydCas9containsaSV40Tantigennuclearlocalizationsequence(NLS)attheC-terminusoftheprotein.ProductSource
EnGen®SpydCas9isexpressedasaN-terminal6XHis-taggedfusioninE.coli.ReagentsSupplied
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| NEBuffer™3.1 | -20 | 10X |
Notes:
20µMisequalto~3.6mg/mland1uMisequalto~0.18mg/mlEnGen®SpydCas9.ThisproductiscompatIBLewithDiluentBufferB:300mMNaCl,10mMTris-HCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,500µg/mlBSAand50%glycerol.(pH7.4@25°C).蚂蚁淘电商平台
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2021-09-15
2017 年 4 月，维通达自主研发的基因修饰明星小鼠模型 NPG 小鼠，荣登国际著名学术期刊《Cell》，人源化 NPG 荣登《Molecular Therapy》。为此，维通达特推出【大小鼠基因敲除服务 买一赠一活动】。我们用更便捷、更专业、更优质的动物模型，助您成就科研梦想。活动时间：2017 年 6 月 1 日～2017 年 8 月 31 日活动内容：基因敲除小鼠 49800（买一赠一） 立即购买 >> 1.最快... 查看更多
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2018-06-02
细胞、细菌内基因的定点敲除、敲入 Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats（CRISPR）是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制，其中 II型 CRISPR/Cas免疫系统依赖 Cas9内切酶家族靶向和剪切外源 DNA。在这一系统中， crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与 tracrRNA（trans-ac... 查看更多
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2021-08-23
威斯腾生物在发布的细胞系基因靶向操作服务（单细胞基因敲除细胞系构建、LnRNA敲除细胞系构建、miRNA敲除细胞系构建、单基因激活细胞系构建、定点突变细胞系构建、基因敲除小鼠构建、基因敲入小鼠构建等）威斯腾生物，让科研更简单！供应信息，浏览与细胞系基因靶向操作服务（单细胞基因敲除细胞系构建、LnRNA敲除细胞系构建、miRNA敲除细胞系构建、单基因激活细胞系构建、定点突变细胞系构建、基因敲除小鼠构建、基因敲入小鼠构建等）威斯腾生物，让科研更简单！相关的产品或在搜索更多与细胞系基因靶向操作服务（单细胞基因敲 查看更多
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2018-06-13
转基因动物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不可或缺的作用，拜睿生物模式动物对于生命科学、人类医药和健康研究领域的发展有着不 查看更多
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2021-08-16
10000平米全新模式生物研究中心：正式启用新模式生物研究中心兴建于太仓沙溪，总面积达10000平米，其中5000平米为SPF级别动物实验室，配备有IVC和EVC饲养设备超过500套，可养殖SPF级别大小鼠近30000笼，动物种群规模超10万只。 1000篇引用文献12000合作实验室：成功保障赛业生物每年可构建基因敲除鼠、转基因鼠10000例以上，合作单位涵盖全球的生命科学实验室和跨国制药公司。学术引用文献已超千篇，并多次发表在... 查看更多
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2018-03-20
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的CDKN2A Knockout Cell Lysate; CDKN2A基因敲除细胞裂解物-CRISPR供应信息，浏览与CDKN2A Knockout Cell Lysate; CDKN2A基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的产品或在搜索更多与CDKN2A Knockout Cell Lysate; CDKN2A基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的内容。 查看更多
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2017-12-11
弗元生物，专注干细胞与再生医学研究，在干细胞、再生医学、基因编辑方向上竭力，为生物医学的发展做出自己的贡献。弗元生物细胞基因编辑平台与中科院合作开展CRISPR/Cas9细胞基因编辑工作，平台使用该技术编辑基因超过300例，具有丰富的实际操作经验。在非致死基因的敲除上成功率接近100%。目前，平台仅针对细胞进行操作，目标细胞包括肿瘤细胞系、永生化细胞系、原代细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、iPS。平台采用独有的操作体系，可以快速在常规细... 查看更多
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2018-03-20
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的CRISPR/Cas9 Validated PLA2G12A sgRNA; 基因敲除sgRNA供应信息，浏览与CRISPR/Cas9 Validated PLA2G12A sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的产品或在搜索更多与CRISPR/Cas9 Validated PLA2G12A sgRNA; 基因敲除sgRNA相关的内容。 查看更多
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2017-10-02
百奥迈科生物技术有限公司在发布的Precut SgRNA Cloning kit & pSD-gRNA Plasmid（CRISPR/Cas9 基因敲除技术）供应信息，浏览与Precut SgRNA Cloning kit & pSD-gRNA Plasmid（CRISPR/Cas9 基因敲除技术）相关的产品或在搜索更多与Precut SgRNA Cloning kit & pSD-gRNA Plasmid（CRISPR/Cas9 基 查看更多
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2021-08-20
博雅辑因（北京）生物科技有限公司在发布的VASP Knockout Cell Lysate; VASP基因敲除细胞裂解物-CRISPR供应信息，浏览与VASP Knockout Cell Lysate; VASP基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的产品或在搜索更多与VASP Knockout Cell Lysate; VASP基因敲除细胞裂解物-CRISPR相关的内容。 查看更多
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上海博舜生物科技有限公司在发布的TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 供应信息，浏览与TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 相关的产品或在搜索更多与TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 相关的内容。 查看更多
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2021-06-03
基因敲除CruiserCel同源。该酶能够高效特异地识别异源双链的突变位点，并从突变位点的端高效地切割异源双链。基因敲除 特点20min ●特异性极高：精准定位突变位点，准确得出突变数 ●检测范围广：可用于检测的片段用于、、和实验的活性检测、突变效率检测、阳性克隆筛选DNA ●SNP ● ●DNA... 查看更多
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基因敲除新技术123
brightpeng2021-07-23
各位老师，咨询基因敲除技术Cre/loxP系统和CRISPR/Cas系统差异？谢谢！
关于CRISPR/Cas9基因编辑技术,表述不正确的是（） 上学吧继续教...123
vhxfhggffffbjg2021-08-11
Overview of CRISPR/Cas9
http://www.addgene.org/crispr/guide/
http://www.addgene.org/crispr/guide/
crispr dcas9怎么同时激活和转录123
猴79825期陡2021-08-30
“基因敲除狗”，“基因敲除猪”，CRISPR/Cas9到底是怎样一个技术技术近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。科研人员所使用的“基因编辑技术”，顾名思义，能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。一、与诺奖“擦肩而过”的CRISPR/Cas9技术这不是CRISPR/Cas9这项明星技术第一次得到人们的关注。在此之前，有着“豪华版”诺奖之称的“2015年度生命科学突破奖”颁发给了发现基因组编辑工具“CRISPR/Cas9”的两位美女科学家——珍妮弗？杜德娜和艾曼纽？夏邦杰。二人更是获得了2015年度化学领域的引文桂冠奖——素有诺奖“风向标”之称，曾被认为是今年诺贝尔化学奖的最有力竞争者。那CRISPR/Cas9到底是一项什么技术，为何能够获得如此这般青睐，又何以在短短两三年时间内，发展成为生物学领域最炙手可热的研究工具之一，并有近700篇相关论文发表？它将来又会如何影响到我们的生活？CRISPR/Cas9是继“锌指核酸内切酶（ZFN）”、“类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）”之后出现的第三代“基因组定点编辑技术”。与前两代技术相比，其成本低、制作简便、快捷高效的优点，让它迅速风靡于世界各地的实验室，成为科研、医疗等领域的有效工具。二、CRISPR/Cas系统的灵感来源CRISPR/Cas9技术的灵感来源于细菌的一种获得性免疫系统。与哺乳动物的二次免疫应答类似，细菌在抵抗病毒或外源质粒入侵时，会产生相应的“记忆”，来抵抗该种外源遗传物质的再次入侵，而这种获得性免疫正是由细菌的CRISPR/Cas系统实现的。在细菌的基因组上，存在着串联间隔排列的“重复序列”，这些重复序列相对保守，我们称之为CRISPR序列（Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats—成簇的规律间隔的短回文重复序列）。1、“记录”入侵者档案其中的“间隔序列”来源于病毒或外源质粒的一小段DNA，是细菌对这些外来入侵者的“记录”。（如图A所示）。图1 CRISPR序列示意图其中，菱形框表示高度可变的间隔序列，正方形表示相对保守的重复序列病毒或外源质粒上，存在“原间隔序列”，“间隔序列”正是与它们互相对应。“原间隔序列”的选取并不是随机的，这些原间隔序列的两端向外延伸的几个碱基往往都很保守，我们称为PAM（Protospacer adjacent motifs-原间隔序列临近基序）。当病毒或外源质粒DNA首次入侵到细菌体内时，细菌会对外源DNA潜在的PAM序列进行扫描识别，将临近PAM的序列作为候选的“原间隔序列”，将其整合到细菌基因组上CRISPR序列中的两个“重复序列”之间。这就是“间隔序列”产生的过程。2、打击二次入侵者当外源质粒或病毒再次入侵宿主菌时，会诱导CRISPR序列的表达。同时，在CRISPR序列附近还有一组保守的蛋白编码基因，称为Cas基因。CRISPR序列的转录产物CRISPR RNA和Cas基因的表达产物等一起合作，通过对PAM序列的识别，以及“间隔序列”与外源DNA的碱基互补配对，来找到外源DNA上的靶序列，并对其切割，降解外源DNA。这也就实现了对病毒或外源质粒再次入侵的免疫应答。正是基于细菌的这种后天免疫防御机制，CRISPR/Cas9技术应运而生，从而使科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点进行修饰。三、CRISPR/Cas9技术的实现需要什么？在CRISPR/Cas9技术中，我们把即将被编辑的细胞基因组DNA看作病毒或外源DNA。基因编辑的实现只需要两个工具——向导RNA（guide RNA， gRNA）和Cas9蛋白。其中，向导RNA的设计并不是随机的，待编辑的区域附近需要存在相对保守的PAM序列（即三碱基序列NGG，其中N可以是任意碱基），而且向导RNA要与PAM上游的序列碱基互补配对。以基因敲除为例，如图3所示，在待敲除基因的上下游各设计一条向导RNA（向导RNA1，向导RNA2），将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，向导RNA通过碱基互补配对可以靶向PAM附近的目标序列，Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂。对于DNA双链的断裂这一生物事件，生物体自身存在着DNA损伤修复的应答机制，会将断裂上下游展开
酿酒酵母做crispr基因敲入donor dna加多少123
韩晓柒37592021-09-11
利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。2.诱导性基因敲除也是以Cre/loxp系统为基础，但却是利用控制Cre表达的启动子的活性或所表达的Cre酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性，从而在1oxP动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型;激素诱导型;腺病毒介导型。
利用CRISPR@@Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系123
pregene2021-08-29
客户提供：
1.目的基因信息(GenBankAccessionnumber、GeneID、或关键词)。
2.细胞系和培养条件
基因敲除方法及其应用123
莫奈008072021-07-29
基因敲除，互补，功能研究等实验怎么做
做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后，通过致病力筛选、Tail-PCR获得侧翼序列、比对获得全基因之后，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，现在正在构建互补载体，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定、胞外多糖分泌测定、生长曲线、致病性测定等等，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的。
做黄单胞，在通过Tn5构建转化子库之后，通过致病力筛选、Tail-PCR获得侧翼序列、比对获得全基因之后，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，现在正在构建互补载体，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定、胞外多糖分泌测定、生长曲线、致病性测定等等，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的。
话说CRISPR技术的利与弊123
愿萌安好5311262017-10-29
优点:使用方便，构建简单，可以覆盖大多数区域的基因编辑需求，成本低。
缺点：质粒仍然较大，转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性，局限了基因编辑的运用范围，而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
缺点：质粒仍然较大，转染难度相对较大。具有碱基识别偏好性，局限了基因编辑的运用范围，而且会导致不同基因位点编辑效率不同。筛选仍然需要较大工作量。
基因敲除P53123
liuhua2021-08-19
可以在DNA水平鉴定，也可以在RNA水平，蛋白质水平鉴定。
如果觉得答案解决了你的问题，请采纳，有问题可继续追问,如未回答追问，可能是不在哦
如果觉得答案解决了你的问题，请采纳，有问题可继续追问,如未回答追问，可能是不在哦
手把手教你学会 CRISPR Cas9 基因敲除技术123
寒月的梦2021-08-24
Crispr/cas9是第三代基因敲除技术，上半年频繁发表于Science，Nature等杂志。由于老板有想法做基因敲除，现在在研究这方面的文献。发现其中有很多问题，本人研二，吧里有没有其他人感兴趣。一起交流！QQ415968281
基因编辑技术crispr/cas9和农杆菌转基因技术的不同– 960问答123
爱臌2021-08-27
中山大学人类胚胎遗传性致病基因修复实验采取了CRISPR／Cas9基因编辑技术。该技术是近年在锌指核酸酶（ZFN）技术、类转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）技术之后出现的新型基因编辑技术，原理来自细菌的适应性免疫防御机制。相比传统的基因打靶技术和其他基因编辑技术，CRISPR／Cas9更为精确、高效和经济。
科学家发现，细菌在遭遇噬菌体等病毒侵染之后，可以获得其部分DNA（脱氧核糖核酸）片段并整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，转录出相应的RNA（核糖核酸），利用其中的“定位信息”引导Cas蛋白复合物定位和切割、彻底地摧毁入侵病毒的DNA。CRISPR／Cas9技术就是利用这一原理，用一种定制的RNA引导Cas，对预设DNA位点进行切割，造成DNA断裂，启动细胞内基因组修复机制，实现基因敲除、特异突变的修复或引入和定点转基因等。
科学家发现，细菌在遭遇噬菌体等病毒侵染之后，可以获得其部分DNA（脱氧核糖核酸）片段并整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，转录出相应的RNA（核糖核酸），利用其中的“定位信息”引导Cas蛋白复合物定位和切割、彻底地摧毁入侵病毒的DNA。CRISPR／Cas9技术就是利用这一原理，用一种定制的RNA引导Cas，对预设DNA位点进行切割，造成DNA断裂，启动细胞内基因组修复机制，实现基因敲除、特异突变的修复或引入和定点转基因等。
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（7）验证敲除WB123
维尼00942021-09-10
CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件[1]。
目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统[1]。
通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作[2,3]。
目前常用的CAS9研究方法是通过普通质粒,质粒构建流程如下：
Cas9质粒构建
目前常见的CAS9普通质粒有（汉恒生物提供cas9质粒试剂盒）：
虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果，但是质粒转染具有效率低，作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题，常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒，慢病毒常用质粒见addgene（lentiCRISPR v2，lentiGuide-Puro，lentiCas9-Blast），慢病毒可以整合入宿主基因组中，长期稳定的表达（汉恒生物提供CRISPR/cas9 慢病毒包装），但是由于慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比较大（大于4kb），且长期插入可能导致乱切，脱靶等，同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因，腺病毒更有优势，腺病毒克隆能力强，获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说，作用是时间也比较长，可以达到更理想的敲除效果。
目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统[1]。
通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作[2,3]。
目前常用的CAS9研究方法是通过普通质粒,质粒构建流程如下：
Cas9质粒构建
目前常见的CAS9普通质粒有（汉恒生物提供cas9质粒试剂盒）：
虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果，但是质粒转染具有效率低，作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题，常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒，慢病毒常用质粒见addgene（lentiCRISPR v2，lentiGuide-Puro，lentiCas9-Blast），慢病毒可以整合入宿主基因组中，长期稳定的表达（汉恒生物提供CRISPR/cas9 慢病毒包装），但是由于慢病毒克隆能力有限而CAS9本身分子量比较大（大于4kb），且长期插入可能导致乱切，脱靶等，同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因，腺病毒更有优势，腺病毒克隆能力强，获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说，作用是时间也比较长，可以达到更理想的敲除效果。
有人用CRISPR/Cas9系统做细胞基因敲除吗交流下 分子生物...123
阿瑟58342021-08-20
基因敲除是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。分为完全基因敲除和条件基因敲除。
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
基因敲除技术的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，自身发展的同时也促进了相关技术的进一步发展。流程大概是这样的：首先获得小鼠ES细胞系，测试ES细胞嵌合入受体囊胚的能力之后根据不同基因、不同目的设计并构建打靶载体，将打靶载体转入一定数目ES细胞中，然后鉴定出带有发生正确同源重组的突变中靶ES细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，是的经过修饰的遗传信息经生殖系遗传，从而得到带有修饰基因的突变小鼠，而后可以对其进行表型分析。
目前，在ES细胞中进行同源重组已经成为一种研究特定基因甚至基因的特定结构域和对小鼠染色体组上任意位点进行遗传修饰的常规技术。1997年通过基因打靶获得的突变小鼠就已经超过千种，近年来随着基因敲除技术的不断进步，尤其是DNA重组技术和小鼠基因组测序的完成，使得建立基因敲除小鼠的周期大大减少，使基因敲除小鼠数目大大增加。各国也都建立了突变体小鼠及转基因小鼠的数据库。
06年8月七日，美国国立卫生研究院宣布将投巨资启动敲除小鼠基因组计划，目的是建立一个完善、免费的小鼠基因组突变基因数据库，研究人员可以利用基因敲除小鼠研发能为治疗癌症、心脏病、神经退行性疾病、糖尿病等人类遗传疾病提供更为优秀的动物模型。展开
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