| 提供商： | 博舜联合医学实验中心 |
| 服务名称： | TALEN靶向技术CRISPR/Cas9系统制备基因敲除、基因敲入大小鼠 |
| 规格： | 3-5只f1代鼠 |
CRISPR/Cas9技术制备基因敲入大、小鼠
ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats（CRISPR）是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制，其中II型CRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。在这一系统中，crRNA（CRISPR-derivedRNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activatingRNA）结合形成双链RNA，此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA，其中Cas9的HNH核酸酶结构域剪切互补链，其RuvC-like结构域剪切非互补链。具体如下图所示：
二、CRISPR/Cas9技术特点
1、靶向精确性更高；RNA靶向序列和基因组序列必须完全匹配，Cas9才会对DNA进行剪切。
2、可实现对多个靶基因位点以及多个基因同时进行敲除。
3、试验周期短，获得F0代仅需2个月。
4、无物种和品系限制，可对大鼠和小鼠进行敲除、敲除、点突变等编辑。
三、服务流程及周期
1、靶向目标序列的GuideRNA设计、显微注射、F0代鉴定；
2、提供3只以上F1代小鼠
3、获得Founder仅需2个月，4个月即可获得F1代
获得F1代杂合子小鼠后，完成基因敲除及表达检测，提供不少于3只F1代杂合子小鼠，通知委托方领取小鼠。
TALEN技术制备基因敲除小鼠
一、技术原理
TALEN（transcriptionactivator-like(TAL)effectornucleases）靶向基因敲除技术是一种崭新的分子生物学工具。研究发现，植物细菌Xanthomonassp.的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。利用TAL的序列模块，可组装识别任意DNA序列的模块化蛋白和重组核酸酶，在特定位点打断目的基因DNA序列，进而在该位点进行DNA操作，如Knock-out、Knock-in或点突变。该技术克服了ZFN方法不能识别任意目标基因序列，以及识别序列经常受上下游序列影响等问题，从而使基因敲除变得更加简单方便。目前已成功的应用到细胞、酵母、植物、斑马鱼、小鼠、大鼠等模式生物中，大大缩减项目的研究周期。
二、TALEN技术特点
1、无基因序列、品系限制，几乎可敲除任意基因。
2、实验设计简单准确、实验周期短、成本低。
3、毒性低、脱靶情况少；成功率几乎可达100%。
4、TAL的核酸识别单元与A、G、C、T有恒定的对应关系。
5、可识别任意目标基因序列，且不受上下游序列影响，具有ZFN相等或更好的活性。
三、服务流程及周期
1、TALEN质粒构建、活性检测、显微注射、Founder检测
2、提供3只以上F1代小鼠
3、Fouder仅需2个月、F1代最快仅需4个月
获得F1代杂合子小鼠后，完成基因敲除及表达检测，提供不少于3只F1代杂合子小鼠，通知委托方领取小鼠。
部分案例展示
Gene Name | Strains | KO/KI | Methods |
Lepr | C57BL/6 | KO | TALEN |
Lepr | FVB/N | KO | TALEN |
Pak1ip1 | C57BL/6 | KO | TALEN |
Gpr55 | FVB/N | KO | TALEN |
Rprm | C57BL/6 | KO | TALEN |
Fbxo6 | C57BL/6 | KO | TALEN |
Smurf1 | C57BL/6 | KO | TALEN |
Tmem74 | C57BL/6 | KO | TALEN |
Wdr20a | C57BL/6 | KO | TALEN |
Dcaf13 | C57BL/6 | KO | TALEN |
Fam73a | C57BL/6 | KO | TALEN |
Th | FVB/N | KO | CRISPR-Cas |
Th | B6 | KO | CRISPR-Cas |
Rheb | B6 | KO | CRISPR-Cas |
Uhrf2 | FVB/N | KO | CRISPR-Cas |
Mc3r | Sprague-Dawley | KO | CRISPR-Cas |
Mc4r | Sprague-Dawley | KO | CRISPR-Cas |
Lepr | Sprague-Dawley | KO | CRISPR-Cas |
博舜联合医学实验中心是一所由复旦大学，华东师范大学，生命科学研究所，上海市调控生物学重点实验室，中国科学院上海药物研究所等同道精英共同打造的一站式医学实验服务平台。我们的顾问团队来自清华大学、复旦大学，交通大学，浙江大学、中山大学、华东师范大学、中国科学院上海药物研究所、德克萨斯农工大学、哈佛医学院、贝勒医学院等知名高校和研究机构的生命科学领域专家、学者组成。
博舜联合医学实验中心长期从事基因敲除/敲入大、小鼠相关工作，团队成员在NatureBiotechnology、NatureProtocol、NucleicAcidsResearch等国际知名杂志发表高水平文章。本公司可通过Cas9、TALEN技术进行基因敲除大小鼠及条件敲除小鼠的制备工作，获得Founder仅需2个月、获得稳定遗传的F1代仅最快仅需4个月。如有需要欢迎来电咨询、交流。电话：021-54800626 www.komouse.com
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