ProducefullyRNaseA-resistantRNAthatisperfectlysuitedforRNAaptamersynthesis,aswellasantisenseRNAandRNAinterference(RNAi)experiments.
- ProtecttranscribedRNAfromRNAsedegradation
- ProducehighRNAyields
- SelectandoptimizeRNAaptamersusingSELEXscreening
- SeeFAQ
TheDuraScribe®T7TranscriptionKit*isaninvitrotranscriptionkitthatproducesRNA-calledDuraScript®RNA-thatiscompletelyresistanttoRNaseAdigestion.
TheDuraScribeT7TranscriptionKitincludesDuraScribeT7RNAPolymerase,anenhancedformulationoftheY639Fmutant1ofT7RNAPolymerasethatefficientlyincorporates2´-Fluorine-CTP(2´-F-dCTP),2´-Fluorine-UTP(2´-F-dUTP),ATPandGTPintoRNase-resistantRNAtranscriptscalledDuraScriptRNA(Figure1).TheDuraScribeT7RNAPolymeraseusesthesameT7promotersasthewild-typeT7RNAPolymerase.
Applications
DuraScriptRNAhasdemonstratedadvantagesforRNAaptamersynthesis,andribozyme,RNAinterference(RNAi)andantisenseRNAstudies.
Features
- DuraScriptRNAisresistanttoRnaseAandDnase
- HighYieldsofDuraScriptRNA
- T7invitrotranscriptionreations.DuraScribeT7RNAPolymeraseusesthesameT7promotersasthewildtypeT7RNAPolymerase.
- IdealforRNAaptamerstudies.NumerouscitationsusingtheDuraScribeKitwithRNAaptamers
- SELEX-compatIBLe.DuraScriptRNAcanbeusedinSELEXselectionprocesses.
- MakelongorshortDuraScriptRNA.Double-strandoligos,linearizedplasmids,andPCRproductswithaT7polymerasepromotercanbetranscribed.
Table1.YieldofDuraScript®RNAfromaDuraScribe®Kitreaction.Onemicrogramofa3-KbDNAtemplatewaslinearizedatdifferentsitesandthentranscribedinaDuraScribeT7TranscriptionKitreactionfor4hours.TheyieldofDuraScriptRNAproducedfromeachtemplateisshowninmicrograms(µg)andinpicomoles(pmol).
SizeofDuraScriptRNAproduced | DuraScriptRNAYield(µg) | DuraScriptRNAYield(pmol) |
2600nts | 100µg | 116pmol |
1400nts | 58µg | 124pmol |
330nts | 18µg | 164pmol |
88nts | 9µg | 307pmol |
Figure1(clicktoenlarge).TheDuraScribe®T7RNAPolymeraseefficientlyincorporates2´-F-dCTPand2´-F-dUTPintofull-lengthDuraScript®RNA.Thepresenceofthefluorineatthe2´-positionofthe2´-F-dCand2´-F-dUnucleotidespreventsdigestionbyRnaseA. | Figure2.YieldofRNAfromaDuraScribe®T7Transcriptionreaction.Astandardreaction(4-6hours)produced40-60µgofa1.4-kbDuraScript®RNA. |
Figure3.DuraScript®RNAisresistanttoRnaseAdigestion.A1.4-kbstandardRNAtranscriptanda1.4-kbDuraScriptRNAtranscriptwereeachincubatedwith1UofhighlypurifiedRnaseAfor30minutes.ThestandardRNAtranscriptwascompletelydegradedwhiletheDuraScriptRNAtranscriptremainedintact.LaneM,sizeladder;lane1,1.4-kbstandardRNAtranscript;lane2,standardRNAafterRnaseAtreatment;lane3,1.4-kbDuraScriptRNA;lane4,DuraScriptRNAafterRnaseAtreatment. | Figure4.DuraScript®RNAiscompletelyresistantto"finger"nucleases.A1.4-kbstandardRNAtranscriptanda1.4-kbDuraScriptRNAtranscriptwereproducedusingsterilewaterorwaterthathadbeencontaminatedbyexposuretothehandsofatestsubject.ThestandardRNAshowsextensivedegradationfrom"finger"nucleasesinthecontaminatedwaterwhiletheDuraScriptRNAremainsfullyintact.M,Sizeladder;Lane1,StandardRNAtranscript;Lane2,StandardRNAafter"finger"nucleaseexposure;Lane3,DuraScriptRNA;Lane4,DuraScriptRNAafter"finger"nucleaseexposure. |
*Coveredbyissuedand/orpendingpatents.
References
- Sousa,R.andPADIlla,R.(1995)EMBOJ.14:184609-4621.
ORDERINFORMATION
Contents:DuraScribeT7EnzymeMix,RNase-FreeDuraScribeT710XReactionBuffer,ATP,GTP,2-F-dCTP,2-F-dUTP,DNaseI,DTT,ControlTemplateDNA(linearized),SterileDeionizedWater.ebiomall.com
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质粒转染一般是说DNA转染,用常用的sinofection等转染试剂就可以;
小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA)有时称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA),是一个长20到25个核苷酸的双股RNA,这种RNA的转染需要用专门的RNA转染试剂。
如题,PolyplusTransfection转染试剂在中国区的代理商有哪些?求推荐1-2个靠谱的,谢谢!
想用RNAiMAX或者lipo2000转染siRNA,但是看了下转染试剂的说明书和锐博的siRNA说明书,觉得分别对siRNA的用量描述差别挺大的呀,不知道到底该参考哪个呢。
以24孔板为例在siRNA说明书中写到,siRNA终浓度是50nM的话,加入浓度为20μM的siRNA1.25ul,每孔体积是500ul,那这样的话,每孔最终siRNA的量是25pmol。
但是在RNAiMAX或者是lipo2000说明书中,一个写的每孔siRNA用量是5pmol,一个是500ng,这与siRNA厂家所提供的量相差也太多了吧。
到底该看哪一个呢。
ps.一旦siRNA的量和体积确定下来之后,转染试剂的量和siRNA1:1的加就可以了吗?
请各位大神解答。
1.siRNA说明书中的用量,红线圈出
2.RNAIMAX说明书中siRNA的用量。
3.lipo2000说明书中siRNA用量
对重复性要求不高的试验,一般没有问题的,只不过可能需要增加一些转染试剂用量了。
为了避免这个问题,推荐收到货之后,进行适当分装,用多少,拿出来多少最好。
但是在选择的时候,也需要注意其他的一些问题。
1、采用何种原料和抗体,是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作,吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
elisa试剂盒就查下博欧特生物
使用方法:
1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分,主要是脂多糖中的类脂A,在细菌被裂解时被释放出来,由于其化学结构和特性,在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率,此外会激活造血细胞(如B细胞、巨噬细胞等)的非特异免疫反应,造成实验的假阳性,所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。
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