SunBio TranspriN原代神经元细胞转染试剂
规格: | 1.0ml |
转染概要
1.细胞状态很大程度上影响了转染效率,转染时保证细胞状态良好,在细胞状态不好的情况下,建议重新准备原代培养的神经元细胞进行转染。
2.为优化转染条件,推荐使用Opti-MEM培养基制备转染试剂和质粒复合物;如果没有准备Opti-MEM培养基则用无血清培养基代替。
3.为起始优化转染条件,转染细胞时可以分别用1/2、2/2、3/2、4/2、5/2转染试剂(μl)和质粒的比例(μg)分别转染。
4.为增加实验的准确性和减少检测的误差,建议进行三个平行孔实验。
5.质粒的抽提质量对转染的效果有很大的影响,建议使用高质量无内毒素抽提的超纯质粒,其螺旋质粒含量大于80%,OD260/OD280>1.8。
转染流程
1.转染前一天,将细胞悬液接种到孔板中,控制细胞转染时的汇合率为70-90%。
2.制备转染试剂和质粒的复合物:
a.取待转染质粒,用Opti-MEM培养基轻轻混匀;
b.取Trans-EZ转染试剂,用Opti-MEM培养基轻轻混匀;
c.将Trans-EZ稀释液滴加到质粒稀释液中,边加边轻轻混匀后在室温放置20分钟,使DNA和Trans-EZ充分结合形成稳定的转染复合体。
3.取出细胞培养板,将步骤2得到的DNA-Trans-EZ复合体加入到接种好的细胞中,前后轻轻推摇孔板使混合均匀,做好标记,放回培养箱。
4.转染24-48小时后,观察质粒荧光转染效果,或者检测Luciferase酶活性,或者收取总蛋白做WesternBlot/RT-PCR等检测。
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发布于 : 2016-08-23
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