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2021-09-01
由上海东松医疗科技有限公司组织招标的《上海交通大学医学院附属仁济医院血流测量仪等设备》(招标编号：0811-DSITC170015)询价采购项目，于2017年1月12日在中国上发布招标信息。 经评审小组评议及用户确认，现将本次评审结果公告如下： 设备名称及数量： 第1包：血流测量仪/壹套 成交供应商：帕瑞医学科技(北京)有限公司 第2包：细胞钙成像系统/壹套 成交供应商：默瑞(上海)生物科技有限公司 第3包：荧光定量P... 查看更多
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2018-12-26
PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途.原位PCR技术 原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合 查看更多
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2018-12-25
1 导言小RNA（miRNAs）是一种内源性非编码蛋白的小分子RNA，它们是许多基础的细胞过程中基因表达的主要调节因子，这些过程包括细胞增殖、细胞分化以及细胞凋亡等。miRNA在肿瘤生长过程中也发挥着重要作用。一般来说，miRNA通过控制翻译过程来 查看更多
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The molecular events that lead to the perception of pain are a key research field in medicine and drug discovery. The opioid receptors modulate pain signaling 查看更多
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2018-12-26
自1987年秋以来，PCR技术的应用开创性地推动了产前单基因缺陷者及携带者的 诊断。目前PCR还不能用于诊断所有已知缺陷疾病，但极大地扩大了实验诊断学家对 诊断方法的选择。JohnHopkins大学的研究人员表明，在诊断基因缺陷疾病方面PCR技 术具有快速、准确、操作灵活等特点。每项进展的实例在以后 查看更多
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2018-12-26
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同源性应小于70％， 查看更多
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2018-12-05
上海英拜生物科技有限公司在发布的microRNA实验85折促销（microRNA靶基因验证，定量PCR，microRNA-Seq，microRNA靶基因分析）供应信息，浏览与microRNA实验85折促销（microRNA靶基因验证，定量PCR，microRNA-Seq，microRNA靶基因分析）相关的产品或在搜索更多与microRNA实验85折促销（microRNA靶基因验证，定量PCR，microRNA-Seq，microRNA靶基因分析）相关的内容。 查看更多
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2018-12-25
v:* {behavior:url(#default#VML);}o:* {behavior:url(#default#VML);}w:* {behavior:url(#default#VML);}.shape {behavior:url(# 查看更多
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2021-08-08
北京孚博生物科技有限公司在发布的小肠结肠炎椰尔森菌荧光定量PCR检测试剂盒供应信息，浏览与小肠结肠炎椰尔森菌荧光定量PCR检测试剂盒相关的产品或在搜索更多与小肠结肠炎椰尔森菌荧光定量PCR检测试剂盒相关的内容。 查看更多
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2018-10-17
近日，明德生物自主研发的EB病毒核酸检测试剂盒（荧光定量PCR法）顺利通过国家食品药品监督管理局审核，获得注册证。注册证号为国械注准20183400411。EB病毒又称人类疱疹病毒4型，主要通过唾液传播，6岁以下多为不典型感染，15-30岁发病，与传染性单核细胞增多症、鼻咽癌以及儿童淋巴瘤等的发生密切相关。目前尚无有效的疫苗可预防其感染。EB病毒感染症状与感冒类似，但抗病毒治疗效果较差，多以对症治疗为主。EB病毒的检测目前分为两种：病... 查看更多
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2018-08-06
LUX 引物用 FAM(6-羧基荧光素）或 JOE(6-羧基-4'，5'-二氯-2'，7'-二甲氧基荧光素）标记。在没有特异模板的反应中，LUX 引物可以对 100 个拷贝或更少的目的基因进行定量，定量范围可以从不足 100 到 107 个拷贝。运用 FAM 和 JOE 标记的引物，提供的检测平台可以同时检测两个基因。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2018-12-26
真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的分化、凋亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30 000个不同的基因，但在生物体内任意细胞中只有10%的基因得以表达，而这些基因的表达是按事件和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即 查看更多
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为什么要做荧光定量PCR?用最实用的讲法说下,谢谢 123
小豪°23952021-07-28
为什么荧光定量pcr可以准确定量
实时定量的引物设计要求比较高，可以按普通引物设计的方法来做，但是设计时要注意扩增的片段不能太大，最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性，因为要是产生非特异性扩增的话，就不能准确的计量模板量了，这样就失去了实时定量的意义了
用已知浓度的DNA样本（通常是质粒）梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候，这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。
标准品的荧光强度和已知的浓度作图，可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后，就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
实时定量的引物设计要求比较高，可以按普通引物设计的方法来做，但是设计时要注意扩增的片段不能太大，最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性，因为要是产生非特异性扩增的话，就不能准确的计量模板量了，这样就失去了实时定量的意义了
用已知浓度的DNA样本（通常是质粒）梯度稀释成一系列的样本。做实验的时候，这些标准品和待测样本加在同样一块96孔盘的不同孔内。一起做PCR。
标准品的荧光强度和已知的浓度作图，可以得到一条标准曲线。而待测样本的荧光强度测出以后，就可以在标准曲线上算出样本浓度了。
荧光定量pcr123
韦小西西2021-07-23
做了三个基因，一个是p38,第二个是glut，第三个是内参，分为四组，对照组，低中高组，每组四个副孔，这个扩增曲线怎么样？不太懂看曲线
定量PCR为什么要用两步法而不是普通的三步法123
猴敦残72017-10-03
你这个结论并不对。两步法，三步法并没有本质区别，信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量PCR一开始的时候也是三步法的。
两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
实时荧光定量PCR仪是什么,它的作用有哪些 今日头条 电子发烧友网123
syj47392017-10-03
实时荧光定量PCR即
Real time PCR(也称实时定量PCR)
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
实时荧光定量PCR 技术的主要应用：
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等
2. 基因表达差异分析：例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 )，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型：例如SNP 检测，甲基化检测等
Realtime PCR 常用的两种方法分别为：Sybr green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法）
SYBR green
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
此方法适用：
1、灵敏度高：使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
3、通用型方法，在国内外科研中普遍使用。
4、高通量大规模的定量PCR检测
5、专一性要求不高的定量PCR检测。
Taqman Probe
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
此方法适用：
1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。
2、适用于扩增序列专一的体系的检测。
3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
4、靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
5、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。
6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。
Real time PCR(也称实时定量PCR)
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
实时荧光定量PCR 技术的主要应用：
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等
2. 基因表达差异分析：例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 )，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型：例如SNP 检测，甲基化检测等
Realtime PCR 常用的两种方法分别为：Sybr green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法）
SYBR green
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
此方法适用：
1、灵敏度高：使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
3、通用型方法，在国内外科研中普遍使用。
4、高通量大规模的定量PCR检测
5、专一性要求不高的定量PCR检测。
Taqman Probe
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
此方法适用：
1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。
2、适用于扩增序列专一的体系的检测。
3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
4、靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
5、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。
6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。
荧光定量 PCR,扩增曲线或溶解曲线异常怎么办?_实验方法_123
月亮欠我九条鱼2021-08-17
跑到还有半小时的时候，跳出一个对话框：“analysiscannotproceed:notenoughsamplesdefined”，最后做出来的结果有扩增曲线但是没有熔解曲线，请各位大神帮忙解释一下。
taq酶价格,哈尔滨正君科技有限公司123
沐雨听风Safari2017-10-03
厚百搜查：Taq DNA Polymerase(5u/μl）500U 1091171000U,5000U快速型Fast Taq DNA Polymerase（5 U/μl）都厚百面查查看图" class="ikqb_img_alink">图" class="ikqb_img_alink">希望能帮啥疑问欢迎追问厚百holdbio提供试剂、耗材等全面实验室用品及实验技术服务科研整体服务（课题设计-实验-SCI）
实时荧光绝对定量PCR实验数据分析哪个指标啊?123
kadirya01122017-10-03
定量pcr跑出了奇怪的结果,求大神指点 PCR技术讨论版论坛123
gezhigezhi2021-08-08
结果如图。A到E都是一个样本，A123是gapdh，后面共有18种引物。f到h是另一个样本，前三个是gapdh，后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr，我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面，前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候，用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值，这是怎么回事呢？几乎在0附近，但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的，这是为什么呢？
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值，这是怎么回事呢？几乎在0附近，但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的，这是为什么呢？
Taq DNA聚合酶使用说明书123
姆姆EH172017-10-03
1单位（U）Taq DNA 聚合酶力定义74°C、30钟内性化马哈鱼精DNA作模板/引物10nmol脱氧核苷酸掺入酸容物质所需酶量图" class="ikqb_img_alink">
定量PCR方法及数据分析123
有木有3803722021-08-06
你所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reversetranscription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtimefluores-cencequantitativePCR）也简称RT-PCR，但是我觉得这是不对的，不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法。实时荧光定量PCR也就是Real-TimePCR，原理有点多，请自行百度百科，其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。至于三者的关系，RT-PCR和实时定量PCR应该都属于PCR，在RNA实验中，这二者都会应用到。例如你要比较2个组织中的某基因的表达差异，首先你要提取2个组织的总RNA，然后通过RT-PCR检测该基因是否在2个组织中有表达，然后通过实时定量PCR测定该基因在2个组织中的表达量是否具有显著性差异。
pcr ct值越高是否说明表达越低,ct值越高说明表达也低,是吗？最后结...123
hnrtn4aO932017-10-03
所谓Ct值，就是最先出现超过阈值信号的那个循环数。或者说是到了第几个循环才出现超过阈值的信号。
C代表的是cycle，循环数目，T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话，需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
C代表的是cycle，循环数目，T代表的是threshold,阈值。
所以表达量越少的话，需要越多的循环才能扩增出来。也就是CT值越高
定量PCR室间质量评价可接受范围的探讨123
国安冠军AH022021-07-20
RNA 定量的程序很多， 比较用了Ribogree,Agilent BioAnalyser,spectrophotometer,Nanodrop and the BioRad Experion 来定量同样的样品。结果显示没有哪两种方法得到同样的分析数据。所以用不同的方法进行定量是不明智的。因此，我们需要用统一套定量分析方法来完成所有RNA样品的评价。
RNA 质量
RNA 质量主要包括RNA的纯度（没有蛋白质和DNA的污染）以及完整性。传统的RNA质量的评价通过分析A260/A280的比值或者对琼脂糖凝胶电泳rRNA的条带的分析。Agilent Bioanalyser/BioRad Experion 微流体毛细电泳系统也是一种较新的分析方法。Agilent的2100也是一种十分好的分析RNA质量的方法，它通过分析18S以及28S rRNA的分析图谱，通过图谱来反应RNA的量和完整性，其完整性通过完整性系数（RIN）来反应。样品的RINs在10-4之间。10代表完整的RNA，4代表没有完整的rRNA带。
由于以上的方法并非100%准确定反应mRNA的完整性，因为他们只是反应rRNA的量来间接测定mRNA的完整性。这里推荐一种方法：采用GAPDH的3’：5’分析法。
我们使用oligo dT进行逆转录，然后对逆转录的cDNA用multiplex荧光定量评价。设计三个taqman探针来定量三种相同大小的扩增产物。探针设计的位点分别位于3’；5’以及中部。扩增产物的之间的比值反应RNA的完整性。如果3’；5’的比值在1，反应较高度完整性，如果高于5说明降解。
QRT-PCR抑制物的组成
QRT-PCR抑制物严重减少了PCR的灵敏度以及热动力学反应，高度的抑制还导致假阴性的结果。
抑制物的来源：生物样品的核酸抽提以及共沉淀中的混合物，盐离子，尿素，血红素，heparin以及IgG.
是否有抑制物的评价体系：
1.通过对目的样品进行梯度稀释进行PCR扩增效率的检测
2.通过内部扩增对照来反应样品处理过程中样本的情况
3.用细菌检测临床样品的抑制
4.通过标准人工合成的扩增进行RT-PCR来反应目标检测物的抑制情况
反转录反应系统
1.RT和PCR单一酶系统
2.RT和PCR分离的酶系统
3.RNA逆转录引物的选择
引物主要有三种：
1.随机引物：随机引物，特别是6nt引物对所有的靶位点不产生十分稳定一致的结果，建议使用15nt的随机引物.
2.oligo-dT：只能用于mRNA完整的样品，特别有polyA .而且对于一些特殊的变异体以及较长的3’UTR的区域比较困难
3.特异引物：最特异最灵敏的方法。特别RNA量足够情况下建议使用此法。
RNA 质量
RNA 质量主要包括RNA的纯度（没有蛋白质和DNA的污染）以及完整性。传统的RNA质量的评价通过分析A260/A280的比值或者对琼脂糖凝胶电泳rRNA的条带的分析。Agilent Bioanalyser/BioRad Experion 微流体毛细电泳系统也是一种较新的分析方法。Agilent的2100也是一种十分好的分析RNA质量的方法，它通过分析18S以及28S rRNA的分析图谱，通过图谱来反应RNA的量和完整性，其完整性通过完整性系数（RIN）来反应。样品的RINs在10-4之间。10代表完整的RNA，4代表没有完整的rRNA带。
由于以上的方法并非100%准确定反应mRNA的完整性，因为他们只是反应rRNA的量来间接测定mRNA的完整性。这里推荐一种方法：采用GAPDH的3’：5’分析法。
我们使用oligo dT进行逆转录，然后对逆转录的cDNA用multiplex荧光定量评价。设计三个taqman探针来定量三种相同大小的扩增产物。探针设计的位点分别位于3’；5’以及中部。扩增产物的之间的比值反应RNA的完整性。如果3’；5’的比值在1，反应较高度完整性，如果高于5说明降解。
QRT-PCR抑制物的组成
QRT-PCR抑制物严重减少了PCR的灵敏度以及热动力学反应，高度的抑制还导致假阴性的结果。
抑制物的来源：生物样品的核酸抽提以及共沉淀中的混合物，盐离子，尿素，血红素，heparin以及IgG.
是否有抑制物的评价体系：
1.通过对目的样品进行梯度稀释进行PCR扩增效率的检测
2.通过内部扩增对照来反应样品处理过程中样本的情况
3.用细菌检测临床样品的抑制
4.通过标准人工合成的扩增进行RT-PCR来反应目标检测物的抑制情况
反转录反应系统
1.RT和PCR单一酶系统
2.RT和PCR分离的酶系统
3.RNA逆转录引物的选择
引物主要有三种：
1.随机引物：随机引物，特别是6nt引物对所有的靶位点不产生十分稳定一致的结果，建议使用15nt的随机引物.
2.oligo-dT：只能用于mRNA完整的样品，特别有polyA .而且对于一些特殊的变异体以及较长的3’UTR的区域比较困难
3.特异引物：最特异最灵敏的方法。特别RNA量足够情况下建议使用此法。
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