UniqEX TaqTM and UniqEX TaqTM LA Mix are available as a ready-to-use 2X mixture of DNA polymerase, salts, magnesium and dNTPs for setting up a trouble-free PCR reaction and there is the choice of an inert green dye, used for direct gel loading. All you have to do is to add template, specific primers and water, thereby save time, effort and minimize pipetting error.
UniqEX TaqTM and UniqEX TaqTM LA Mix are recommended for all standard PCR applications. It is comprised of UniqEX TaqTM or UniqEX TaqTM LA DNA Polymerase that has both hot-start and inhibition-resistant feature, (Click here), and a novel buffer system that deliver very high yield PCR amplification over a wide range of PCR templates. It has been developed to give more robust amplification than other commonly-used mixes, allowing it to perform well with challenging templates and for direct PCR without DNA purification.
Data Sheet: 2X UniqEX Taq & UniqEX Taq LA Mix
VitaNaviTechnolog是华盛顿大学BarnesWayne教授创办的一家专门从事Taq酶及其相关产品研发与销售的生物公司。BarnesWayne教授是国际上著名的Taq酶专家,也是长片段基因PCR扩增技术的发明人和专利所有人(1993,PNAS;U.S.Patent5,436,149)。20多年来,BarnesWayne教授始终致力于PCR聚合酶,研发了系列TaqDNA聚合酶产品,远销全球40多个国家,是目前国际上生产PCR聚合酶的主要供应商之一。美国VitaNaviTechnology公司研发的新型高耐受性DNA聚合酶为基因检测技术带来了根本性的革新,彻底解决了依赖于纯化的核酸DNA为模板进行PCR扩增这一瓶颈问题。 产品简介 Omni酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体,可以直接以全血、血清、土壤、牛奶、巧克力或奶酪等材料为模板一步扩增目的基因,避免了繁琐的核酸DNA提取过程 产品特征:1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性,可直接对样品进行PCR检测,无需DNA分离。2.可以耐受高达40%的全血,20%的血浆或血清。3.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。4.Omni酶节省时间、降低成本.5.直接从微量样品中的扩增,避免样品提取而丢失或污染DNA。
一、Klentaq1/KlentaqLA?实例1:用KelntaqLA扩增大于20kb的大片段基因。??二、高耐受性(Inhibitor-Resistant)聚合酶:OmniTaq/OmniKlentaq产品特征:1.对全血、血清、血浆、土壤、植物、巧克力、奶酪和牛奶中的抑制因子具极高的耐受性,可直接对样品进行PCR检测,无需进行DNA分离纯化。2.可以耐受高达40%的全血,20%的血浆或血清,已应用于多种遗传病的分子诊断和临床检验。3.可用于法医、环境监测、农业、动植物检疫和临床诊断等领域。4.可以从人血液中一步扩增疟疾基因。5.与PCR增强剂结合使用时,其耐受性将进一步提高。6.使用Omni酶不仅节省时间、降低成本,而且实现了从微量样品中的扩增,避免因提取过程所致的DNA丢失或污染。实例2:用OmniTaq(OT)和OmniKlentaq(OKT)从肝素抗凝血液中一步扩增乙肝病毒基因。?实例3:用新突变的Omni酶从富含腐殖酸的人基因组中扩增1.1kb的CCR5基因。?实例4:用新突变的Omni酶从巧克力和黑胡椒中直接扩增基因。?三、热启动聚合酶(Hot-start)聚合酶:CesiumTaq/CesiumKlentaq产品特征:1.CesiumTaq和CesiumKlentaq是一种冷敏感的突变体,在室温条件下聚合酶的活性很低,当升高温度进入PCR循环时聚合酶的活性就全部释放出来,因而具有内置式热启动功能。2.与现有化学修饰或抗体封阻的热启动聚合酶相比,CesiumTaq和CesiumKlentaq的聚合酶活性更高,扩增效果更好。3.CesiumKlentaq具有热启动和高耐受性双重效果。实例5:用CesiumKlentaq扩增基因热启动效果比较?四、PCR增强剂(PCRenhancingcocktails,PEC)产品特征:1.联合使用PEC-1或PEC-2与高耐受性Taq酶(OmniTaqandOmniKlentaq)可以更好的克服样品中各种物质对PCR反应的抑制作用,进一步提高PCR扩增效率,简化PCR操作流程提高。2.PEC有助于从基因组中扩增GC含量高达80%的基因。3.PEC也可用于qPCR(SYBR和Taqmanprobe)。4.新研发的PCR增强剂PEC-3andPEC-4有助于从食品中扩增基因。?实例6:联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂(PEC)从不同类型的牛奶中检测沙门氏杆菌Inv基因。??实例7:联合使用OmniTaqorOmniKlentaq及PCR增强剂(PEC)从人的基因组DNA或全血中直接扩增3个高GC含量的基因。?五、各种特异性一步PCR试剂盒VitaNaviTech公司开发了系列一步法PCR和qPCR试剂盒,可以直接从样品中扩增目的基因。1.DirectBloodPCRKit:从血液中直接扩增目的基因实例8:使用DirectBloodPCRKit从全血中一步扩增CCR5基因
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在另外的一组管子中,加入已知拷贝数的DNA同时扩增,每个管子中加入的数量是不同的,但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。
PCR反应完成后,把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线,再把待测样本的CT值和该标准曲线比对,就可以得到样本中的起始拷贝数了
两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便。三步法的话,花的时间长,不利于快速实验。
Real time PCR(也称实时定量PCR)
定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术,即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量,不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法,已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。
实时荧光定量PCR 技术的主要应用:
1. DNA 或RNA 的绝对定量分析:包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测,RNAi 基因失活率的检测等
2. 基因表达差异分析:例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等 ),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
3. 基因分型:例如SNP 检测,甲基化检测等
Realtime PCR 常用的两种方法分别为:Sybr green(荧光染料掺入法) 和Taqman probe (探针法)
SYBR green
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
此方法适用:
1、灵敏度高:使用SYBR可使荧光效果增强到1000倍以上
2、通用性好,不需要设计探针,方法简便,省时,价格低廉。
3、通用型方法,在国内外科研中普遍使用。
4、高通量大规模的定量PCR检测
5、专一性要求不高的定量PCR检测。
Taqman Probe
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步
此方法适用:
1、具有高适应性和可靠性,实验结果稳定重复性好,特异性更高。
2、适用于扩增序列专一的体系的检测。
3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。
4、靶基因的特异序列较短,无论怎样优化引物设计条件都不能解决。
5、存在与靶基因同源的序列,在PCR中容易出现非特异性扩增,对特异性要求较高的定量。
6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量,在动物病原体基因的检测,畜禽产品的检验检疫,生物制品的鉴定。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
检测指标是:各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳,GoldView染色,检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
原理:
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
国产的有上海宏石,枫岭,中山达安基因,上海科华生物,大约10-15万。
进口的有ABI公司的大约45万,罗氏诊断的大约40万,Bio-Rad的大约30万。
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