实时 PCR
一旦RNA收集纯化完成，可以采用对不同的细胞质或核糖体RNA专一的商业化的实时PCR试剂盒，以组成型的rRNA为标准对所有资料进行标定。本实验来源于PCR实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。
8 收藏 0 阅读一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
来自方案 5 的 cDNA 样品
20X18SrRNA 引物和探针（AppliedBiosystems)
20X 目的基因的引物和探针（AppliedBiosystems)
2XTagManUniversalPCRMasterMix(4304437,AppliedBiosystems,FosterCity,CA)
DEPC 处理的超纯水 (BiotecxLaboratories)(储存于 4°C)
试剂储存于-20°C
2. 特殊货备
AppliedBiosystems7700 序列监测仪（PEAppliedBiosystems，FosterCity，CA)
二、方法
1. 稀释来自方案 5 的 cDNA，1:100
2. 用 1ul 稀释溶液做对照反应，10ul 做目的反应
3.PCR 循环条件
(1)50°C，2 min。
(2)95°C，10 min。
(3)PCR 循环--n 个循环。
a.95°C,15s。
b.60°C,1min。
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发布于 ： 2018-08-06
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