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记得08年左右的时候，正是辅酶Q10大行其道之时。各大品牌都在广告里力推含辅酶Q10的护肤品，说得很神奇，抗皱紧肤什么的。近几年发现很少有护肤品含有辅酶Q10了，广告也没有再提过Q10的事？请问是不是这东西没用，或是有副作用？为什么大牌护肤品都放弃Q10了...

辅酶、辅基和激活剂根据酶催化反应最适条件的要求，原则上在酶测定体系中应加入一定量的辅助因子。辅助因子（cofactors）是指酶的活性所需要的一种非蛋白质成分，包括辅酶、辅基和金属离子激活剂。与酶紧密结合的辅因子称为辅基；不含辅基的酶蛋白称为脱辅基酶蛋白（apoenzyme），没有催化活性，必须加入足量辅基，和它结合成为全酶（holoenzyme），才有催化活性。脱辅基酶蛋白与辅基孵育一段时间后，酶活性才会恢复，因此，往往需要样品与试剂中的辅基先预孵育的过程。辅基的用量往往较少。与酶蛋白结合很松弛，用透析和其它方法很易将它们与酶分开的称为辅酶（Coenzyme）。辅酶尽管不同于酶的底物，但在作用方式上和底物类似，在酶反应过程中与酶结合、分离及反复循环。辅酶用量的确定可将它们按底物处理。例如乳酸脱氢酶中辅酶按双底物动力学方程计算。激活剂（activator）的化学本质是金属离子，可以是酶的活性中心，也可以通过其他机制激活酶的活性。作为激活剂的金属离子，其影响酶促反应的动力学更加复杂。最常见的是二价金属离子如Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ca2+、Fe2+等。重金属离子大多是酶的变性剂。金属离子之间往往存在相互拮抗或相互抑制。在酶测定体系中经常加入EDTA目的是螯合一部分非必要的离子。合适的金属离子浓度是必要的，过量的离子往往抑制酶反应速度。由于激活剂的动力学往往与酶的动力学不同，这就可以解释不同的样品与反应液的比例，造成酶活性测定结果的不呈比例。N-乙酰半胱氨酸对肌酸激酶的激活作用与此类似。激活剂的用量一般通过反复实验来确定。辅酶Q-10有助于：（1）保护心脏：辅酶Q-10有助于为心肌提供充足氧气，预防突发性心脏病，尤其在心肌缺氧过程中辅酶Q10发挥关键作用。（2）促进能量转化，提升精力：辅酶Q-10帮助把食物转化为细胞生存必需的能量（如ATP），使细胞保持最佳状态，使人感觉精力更充沛；（3）提高免疫力，延缓衰老：辅酶Q-10是细胞自身产生的天然抗氧化剂，可阻止自由基的形成，有助于维护免疫系统的正常运作及延缓衰老；近年来的研究表明，辅酶Q-10在预防冠心病，缓解牙周炎，治疗十二指肠溃疡及胃溃疡及缓解心绞痛方面有显著效果。同时还有抗肿瘤作用，临床对于晚期转移性癌症有一定疗效。各种辅酶在生物体正常生长发育中，发挥各种重要的作用，使生命活动有序的进行。

彻底搞败了，而且还有别称，如VitPP又叫烟酸、VitB3；泛酸又叫维生素B5；生物素又叫VitH、VitB7、辅酶R；VitB12又叫钴胺素。准备放弃了……

谷丙转氨酶（简称ALT）升高在临床是很常见的现象。肝脏是人体最大的解毒器官，该脏器是不是正常，对人体来说是非常重要的。ALT升高肝脏功能出现问题的一个重要指标。在常见的因素里，各类肝炎都可以引起ALT升高，这是由于肝脏受到破坏所造成的。一些药物如抗肿瘤药、抗结核药，都会引起肝脏功能损害。大量喝酒、食用某些食物也会引起肝功能短时间损害。
ALT主要存在于肝细胞浆内，其胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞坏死，就可以使血清酶增高一倍。因此，ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。但它并不具器官专一性，许多疾病都可以引起它的增高。明显升高见于急性病毒性肝炎，中度升高见于慢性肝炎、肝硬化活动期、肝癌、肝脓肿，心梗、心肌炎、心衰等也可轻度升高。因此对ALT升高的评价应密切结合临床。部分ALT升高与脂肪肝、饮用酒精有关。临床常用的保肝药物较多。但有些药物治疗效果可以但容易反复，致使一些肝脏疾病长期不能治愈，大量的肝细胞遭受破坏。如何保护肝细胞，是保护肝脏功能的关键所在。

转氨酶只不过是临床上常用的检查肝脏功能的一项指标，转氨酶的正常与否，并不能代表肝功能的好坏，转氨酶的高低也不是与肝脏功能状态呈比例的,转氨酶”水平的高低几乎不能反应肝脏的功能，转氨酶不过是肝细胞里面的一种成分而已，相比较而言这种成分在肝细胞中的含量比较高，肝细胞一旦遭到打击和破坏，转氨酶就被释放到了血液。而在这个时候，如果损害的肝脏细胞不多，肝脏完全能够正常工作
通常，体检中主要检查的转氨酶是丙氨酸转氨酶(ALT)。1%的肝脏细胞损害，
可以使血中ALT的浓度增加1倍。因此，ALT水平可以比较敏感地监测到肝脏是否受
到损害。

转氨酶水平在0—40之间是正常的。如果超出正常范围，医生会建议再查一次
，排除由于实验室设备故障和操作错误等因素造成误差的可能。如果转氨酶水平还
高，多半是由病毒性肝炎或其他肝病所致。但要确定是不是病毒性肝炎，还需要做
其他检查，结合病史、症状、体征等全面分析。

即使确认是病毒性肝炎，也不能简单地以ALT升高的程度来判断病情，因为对
于重型肝炎，可能由于存活的肝细胞比较少，释放到血液中的转氨酶很少，ALT反
而随病情的恶化而降低。

转氨酶高不都是肝炎

ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起转
氨酶增高。主要还有以下情况：

首先，人体内许多组织都含有转氨酶，比如心肌炎和心肌梗死都可能使天冬氨
酸转氨酶升高。

其次，如果有胆结石等胆道梗阻性疾病，可能因为淤胆而使血中转氨酶水平升
高。

此外，对于一些看起来没什么大病的人来说，还有可能因为长期酗酒导致酒精
肝，或饮食结构不合理导致脂肪肝，造成转氨酶高。

劳累也可能让转氨酶升高

对于健康人来说，转氨酶水平在正常范围内升高或降低，并不意味着肝脏出了
问题，因为转氨酶非常敏感，健康人在一天之内的不同时间检查，转氨酶水平都有
可能产生波动。
另外，健康人的转氨酶水平也有可能暂时超出正常范围。剧烈运动、过于劳累
或者近期吃过油腻食物，都可能使转氨酶暂时偏高。如果在检查转氨酶前一晚加班
工作，没睡好觉，或是体检前早餐时吃了油炸的东西，检查结果可能就会超出正常
范围。一个人刚刚在操场上跑了几圈，就立刻检查他的转氨酶水平，结果也可能会
高出正常范围。
如果是由于这些情况导致转氨酶升高，只要好好休息，过一段时间后再做检查
，就会发现转氨酶水平恢复正常了。
还有一种会造成转氨酶升高的情况是生病时吃了会损伤肝脏的药物，比如红霉素、四环素、安眠药、解热镇痛药、避孕药，还有半夏、槟榔、青黛等中药。在停用这些药物后，转氨酶水平会很快恢复正常。
总之，如果发现自己转氨酶高了，不要过于紧张，不要担心自己患了严重的肝脏疾病，但是也一定要给予足够的重视，好好休息，及时接受
正规复查和治疗。展开

我在做小鼠的子宫蜕膜组织，请问下大家，sigma的4型胶原酶工作浓度是多少呢？加多少量合适呢？

Short-chainfattyacidsaltertightjunctionpermeABIlityinintestinalmonolayercellsvialipoxygenaseactivation.

Nutrition.2005Jul-Aug;21（7-8）:838-47.

OBJECTIVE:Involvementoflipoxygenase（LOX）andcyclo-oxygenase（COX）oncellulardifferentiationorapoptosisinducedbybutyratehasbeenreportedrecently,buttheeffectontightjunction（TJ）permeabilityhasnotbeenreported.Onemajoractivityofbutyrateand,toalesserextent,propionateistomodulategenetranscriptionviahistoneacetylationbytheirhistonedeacetylaseinhibitoractivity.Inthisstudy,weevaluatedtheactivationofLOXandCOXinTJpermeabilitychangesbyshort-chainfattyacids,butyrate,propionate,andacetateinintestinalmonolayercellsandtheirpossIBLemechanismbyhistoneacetylation.METHODS:TheeffectsofLOXandCOXinhibitorsonTJpermeabilityandtheexpressionofLOXorCOXmRNAinducedbyshort-chainfattyacidswereinvestigatedinCaco-2cellsusingTranswellchambers.Theeffectsofhydroxyeicosatetraenoicacid（aproductofLOX）onTJpermeabilitywerealsoevaluated.Theeffectsofshort-chainfattyacidswerecomparedwiththoseoftrichostatinA（histonedeacetylaseinhibitor）.RESULTS:ALOXinhibitorclearlyinhibitedtheeffectofbutyrateonTJpermeability,whereasCOXinhibitorsdidnot.TheLOXandCOXinhibitorspartlyinhibitedtheeffectsofpropionatebutnotofacetate.ButyrateincreasedLOXmRNAexpression,andhydroxyeicosatetraenoicacidandtrichostatinAmimickeditseffect.CONCLUSION:Theseresultssuggestthatshort-chainfattyacids,especiallybutyrate,induceTJpermeabilitychangesthroughLOXactivationthroughhistoneacetylation.

在肠腔，短链脂肪酸可以通过激活脂肪氧化酶的活性从而改变单层细胞间紧密连接的通透性

目的：最近，有文献报道了丁酸盐可以诱导细胞的分化或者凋亡，并且这种效应与脂肪氧化酶（LOX）以及环氧合酶（COX）有关，但是，关于丁酸盐对紧密连接的影响目前未见报道。人们已经知道，丁酸盐以及丙酸盐都可以通过他们对组蛋白去乙酰化酶的抑制作用从而引起组蛋白的乙酰化，并最终实现对基因转录的调控。在我们的研究中，我们研究了短链脂肪酸、丁酸盐、丙酸盐以及醋酸盐对肠上皮细胞间紧密连接通透性的影响，以及这种变化过程中LOX和COX的活化情况，并且研究了这些物质引起组蛋白乙酰化的可能机制。
方法：实验者利用Caco-2细胞以及Transwell小室建立肠腔的体外模型，研究了几种LOX、COX抑制物质对紧密连接通透性的影响，以及对LOX、COXmRNA水平的影响。同时，还研究了羟基二十碳四烯酸（这是一种LOX的催化产物）对TJ通透性的影响。在实验中，研究者还将几种短链脂肪酸的效应与曲古抑菌素A（一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂）的效应进行了比较。
结果：使用LOX抑制剂能够明显的抑制丁酸盐所引起的紧密连接通透性的增加，而COX抑制剂则没有这种作用。丁酸盐能够增加细胞中LOXmRNA的表达水平，而羟基二十碳四烯酸以及曲古抑菌素A也都有类似的作用。
结论：以上结果表明，短链脂肪酸，尤其是丁酸盐，能够通过对组蛋白的乙酰化作用活化LOX，并且导致肠上皮细胞间紧密连接通透性的增加。

各位大神大家好，本人菜鸟，目前正在复习生物化学准备考试。我想问下辅酶A在物质代谢中是不是可以作为一个整体来理解？书中都是直接写为COA没写出分子式，是不是在反应中它本身的分子结构没有发生变化？非常感谢！

做磷酸化蛋白WB，提取蛋白时不加磷酸酶抑制剂会有影响，大不大要看具体的实验结果
不加磷酸化抑制剂也可以做磷酸化蛋白WB，但是有可能会影响具体的实验结果，大部分时候不加磷酸化抑制剂也能得到结果的。
需要注意蛋白的磷酸化是一个非常迅速的反应，所以取样品的过程要迅速，样品要新鲜。
所以做磷酸化蛋白WB，提取蛋白时不加磷酸酶抑制剂会有影响

根据辅酶Q10资料整理-蚂蚁淘论坛3楼的辅酶Q10英文教材其中一部分的整理。

荧光素酶报告基因
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。
中文名
荧光素酶报告基因
外文名
Luciferase
底 物
荧光素(luciferin)
生物荧光
bioluminescence
转录因子
反式作用因子
转录因子
行使调控基因表达的蛋白质分子

简介
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。
应用原理
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
其原理简述如下：
（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。
（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。
（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。
（5） 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。
（6） 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
（7）提取蛋白并用于荧光素酶检测。
（8） 加入底物，测定荧光素酶的活性。
（9） 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。
发展
双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时, 通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal, GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL 载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供 PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。双荧光素酶报告基因测试系统将使他们体会到该系统的便利。
体外分泌的荧光素基因:目前NEB公司提供新型的可在细胞外分泌的荧光素酶,分别是Gluc和Cluc,具体使用帮助可在NEB官方网站找到.展开

病情分析：你好，在化验肝功能时，转氨酶高提示肝细胞有损伤的情况的，不过如果只是稍微高一点，这个到不要紧的意见建议：有时在化验前休息不好，睡眠不足，饮食不节，过度饮酒或劳累，精神压力大，都有可能引起转肝功能轻度异常的，如果你没有不适的症状，可以先观察一段时间，在这个期间有一个合理的生活和饮食习惯，保持心情舒畅，避免过度劳累，这样会很好的。

酶抑制剂是一类可以结合酶并降低其活性的分子。由于抑制特定酶的活性可以杀死病原体或校正新陈代谢的不平衡，许多相关药物就是酶抑制剂。一些酶抑制剂还被用作除草剂或农药。并非所有能和酶结合的分子都是酶抑制剂，酶激活剂也可以与酶结合并提高其活性。

酶抑制剂新药发现的途径：一是来源于天然化合物，包括动植物和各种微生物等，二是化学合成物。在目前上市的药物中，以受体为作用靶点的药物占52%，以酶为靶点的药物占22%，以离子通道为靶点的药物占6%，以核酸为靶点的药物占3%。因此，酶抑制剂的开发是新药来源的一个主要途径。以酶为靶点开发新药存在巨大潜力，今后很长一段时间仍然是发现新药的重要着手点。