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请教各位高手：
晶状体醛糖还原酶测定方法的具体步骤！
谢谢！
盼回复！
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不胜感激！

同题，请大神指正

1.反应混合液

0.2MTris-HCl缓冲液pH=8.00.20ml

15mM4-AA溶液0.10ml

0.2%（w/v）苯酚溶液0.10ml

2.0M甲醇溶液0.25ml

50U/mlPOD溶溶液0.10ml

超纯水0.25ml

备注：

*50U/mlPOD溶液：将500U的POD溶于10ml超纯水中并混匀。

2.反应终止液

无水乙醇

3.酶稀释缓冲液

10mMTris-HCl缓冲液pH=8.0

4.说明

（1）4-AA：4-氨基安替比林

（2）POD：辣根过氧化物酶

5.过程

精确称量约20mg样品，加酶稀释缓冲液至总量为20ml，用酶稀释缓冲液稀释，根据需要调节浓度（χ，χ≤0.04mg/ml）

6.实验

1.准确地吸取1.0ml反应混合液到小试管中后，在37℃预孵育。

2.5分钟后，加入50μL酶溶液，并在37℃混合开始反应。在空白对照中，加入50μL酶稀释缓冲液代替酶溶液。

3.在反应开始5分钟后，加入2.0ml反应终止液以终止反应。

4.测量480nm处的吸光度。

吸光度样本溶液：As

空白对照：Ab

△A=（As-Ab）≤0.20Abs

相关疾病：肝脏外伤病毒感染婴儿，四个月+18天，白细胞16x10⑼超敏17，反复发烧38-39.5度，轻微吐奶，偶尔有咳嗽，主...

*辅酶Q10 是人体自行合成的营养素。其合成量会在我们年届20岁之后便持续降减。到了50岁时，我们体内的辅酶Q10数量会比20岁时减少50%，年届70岁时则减少60%！人体的辅酶Q10产量会因为以下种种不利因素而进一步衰减：
--精神压力 - 身体在承受精神压力下，会消耗更多的辅酶Q10。
--环境污染和毒素侵害 - 导致辅酶Q10的消耗速度加快。
--精神压力 - 身体在承受精神压力下，会消耗更多的辅酶Q10。
--环境污染和毒素侵害 - 导致辅酶Q10的消耗速度加快。
--吸烟 - 即使是二手烟也会造成体内的辅酶Q10快速耗尽。
--运动 – 常做运动能使身体保持良好状况，但同时身体也会产生自由基。所以我们的身体需要抗氧化剂如辅酶Q10，来抑制自由基的侵害。
--食用医生常开的降胆固醇药物。
--某些食物（包括动物内脏、牛肉、鱼肉和果仁）虽含有辅酶Q10，但是，我们得大量进食这些食物才能从中摄取足够的份量。
*辅酶Q10能在人体内产生效用
大部分细胞都含有介于500至2,000的粒线体。这些粒线体犹如小小的“能量工厂”，把我们所吃的食物转化为能量。研究显示，人体血液中的辅酶Q10水平一旦减少25%，体内的主要器官（尤其是心脏）就会因为能量不足而无法维持最佳运作状态。
#重拾无穷精力和干劲
人体细胞需要能量以建构和修复组织、清除危害健康及致病的细胞废物或毒素、抵御细菌和病毒感染，以及调节器官机能。辅酶Q10是促进能量生产的要素，缺乏辅酶Q10，体内的能量生产速度就会减缓。
#心脏更强健
心肌需依赖辅酶Q10以生产足够的能量。由于人体内的辅酶Q10量会随着年龄的增长而持续降低，当您年逾50岁时，您的心脏就会因为匮乏能量而出现状况 ， 无法正常的把足够的氧份和重要的营养素输送至身体各个器官和组织。如此一来，细胞就无法生产足够的能量好让身体保持活力，随之出现疲倦和健康衰退的现象。因此，要是您经常感觉疲惫，很可能是您的心脏在渴求辅酶Q10。
根据德克萨斯大学的研究显示，心脏病患者体内的辅酶Q10水平往往低于没有心脏病的人士。超过75%的心脏病患者在服用辅酶Q10作治疗之后，病情显著改善。辅酶Q10不仅能为心肌生产能量，也能稳定心脏脉冲和心脏导电系统，减低罹患心律异常或心悸问题的风险。
#血压更健全
心脏一旦能生产更多能量，便能发挥更强劲的脉动能力。如此一来，体内的血液循环便有所改善。由于血液更流通，血管更具灵活弹性（辅酶Q10对血管产生抗老化作用所致），血压自然也就更健全。不过，血压的降减现象须在服用辅酶Q10至十二个星期才可见效。高血压是无声的杀手，足以造成中风，心脏病发作、心脏和肾脏衰竭。
更健全的胆固醇水平
辅酶Q10 是一种强效的抗氧化剂，能抗防LDL“不良”胆固醇的氧化，使人体内的胆固醇保持于健康水平。LDL 的氧化会造成不良胆固醇更易粘附在血管壁，导致血管阻塞。这就是为何没有高胆固醇的人士也会出现血管阻塞之故。辅酶Q10的抗氧化作用比维他命E更胜一筹。更妙的是，辅酶Q10还能为体内“用过的”维他命E再充电，好让维他命E恢复十足劲力。维他命E与辅酶Q10能结合一股超强防护力量，预防心血管疾病。
#增进脑力
如果您的头脑不如以往般的敏锐，或者常觉得精神疲倦，难以清晰地思考，这可能只因您体内缺乏辅酶Q10之故。您的脑部细胞需要大量能量以维持最佳运作状态。只要这些细胞能取得无穷的能量供应，您必能感觉头脑敏捷，思维清晰。
#增强身体的抵抗力
辅酶Q10 能增强人体免疫细胞，使它们更有活力，更能抵抗疾病之侵。免疫细胞一旦获得更多能量，就能更强力地保护人体及清除微生物，毒素和致病的突变细胞。辅酶Q10 也能增加免疫细胞数量，为人体提供更周全保护。
#容颜更显，青春焕发
氧化所带来的破坏力是导致皮肤老化迹象的罪魁祸首，也是引发种种皮肤炎（包括皮肤发疹和湿疹）的祸根。自由基侵袭皮肤内的胶原蛋白和弹性纤维，造成皮肤失去弹性，随之变得松弛及出现皱纹。自由基也导致肌肤出现色素斑和色泽不均匀。辅酶Q10 是一种强效抗氧化剂，能抑制自由基侵害，使肌肤更显光泽，容光焕发及青春常驻。
#辅酶Q10 的其它功效
帮助糖尿病患者调节血糖量，并且有助于预防最常见于糖尿病患者的多种心脏问题。
减轻牙周问题，例如牙龈退缩，牙齿松动，牙龈肿胀。
舒解气短和心悸问题。
并非所有的辅酶Q10营养品都一样有效果！
市面上贩售的大多数辅酶Q10营养品，不容易被人体吸收，而这些未经吸收的营养素，不管品质有多好，对身体根本毫无益处，只是浪费金钱！
辅酶Q10之所以难以被人体吸收，原因在于辅酶Q10是一个非水溶性及只有部分可在脂质中溶解的大粒子。要确认您所食用的辅酶Q10是否能溶解及被您的身体所吸收，可将辅酶Q10胶囊内容物倒入一杯清水（若是凝胶丸，可把它切开）。如发觉即使加以搅拌之后仍无法跟水溶和在一起，表示就算您服用此辅酶Q10,也难以被您的身体所吸收利用, 而造成浪

原题
Identificationofmembranetype-1matrixmetalloproteinaseasatargetofhypoxia-inducIBLefactor-2[alpha]invonHippel-Lindaurenalcellcarcinoma.[Article]
来源
Oncogene.24(6):1043-1052,February3,2005.
AccessionNumber
00006374-200524060-00010.
Author
Petrella,BrendaL1;Lohi,Jouko3;Brinckerhoff,ConstanceE*,1,2
Institution
(1)DepartmentofBiochemistry,NorrisCottonCancerCenter,DartmouthMedicalSchool,Lebanon,NH03756,USA;(2)DepartmentofMedicine,NorrisCottonCancerCenter,DartmouthMedicalSchool,Lebanon,NH03756,USA;(3)DepartmentofPathology,HaartmanInstitute,UniversityofHelsinkiandHelsinkiUniversityCentralHospital,Helsinki,FIN-00014,Finland
摘要原文
Metastaticrenalcellcarcinoma(RCC)resultingfromthehereditarylossofthevonHippel-Lindau(VHL)tumorsuppressorgeneistheleADIngcauseofdeathinVHLpatientsduetothedeleteriouseffectsofthemetastatictumor(s).VHLfunctionsinthedestructionofthealphasubunitsoftheheterodimerictranscriptionfactor,hypoxia-induciblefactor(HIF-1[alpha]andHIF-2[alpha]),innormoxicconditions.WhenVHLfunctionislost,HIF-[alpha]proteinisstABIlized,andtargethypoxia-induciblegenesaretranscribed.Theprocessoftumorinvasionandmetastasisinvolvesthedestructionoftheextracellularmatrix,whichisaccomplishedprimarilybythematrixmetalloproteinase(MMP)familyofenzymes.Here,wedescribeaconnectionbetweenthelossofVHLtumorsuppressorfunctionandtheupregulationofmembranetype-1MMP(MT1-MMP)geneexpressionandprotein.Specifically,MT1-MMPisupregulatedinVHL-/-RCCcellsthroughanincreaseingenetranscription,whichismediatedbythecooperativeeffectsofthetranscriptionfactors,HIF-2andSp1.Further,weidentifyafunctionalHIF-bindingsiteintheproximalpromoterofMT1-MMP.Toourknowledge,thisisthefirstreporttoshowdirectregulationofMT1-MMPbyHIF-2andtoprovideadirectlinkbetweenthelossofVHLtumorsuppressorfunctionandanincreaseinMMPgeneandproteinexpression.
编译
vonHippel-Lindau(VHL)肿瘤抑制基因遗传性丢失引起的转移性肾细胞癌（RCC）在VHL病人中导致死亡的原因是转移性瘤的有害作用。在含氧正常情况下，VHL作用是破坏异二聚转录因子和缺氧诱导因子（HIF-1[a]和HIF-2[a]）的a亚基。当VHL作用丧失后，HIF[a]蛋白变的稳定，并且靶缺氧诱导基因被转录。肿瘤侵入和转移的过程包括细胞外基质的破坏—主要通过基质金属蛋白酶（MMP）家族的酶完成。研究者阐明了VHL肿瘤抑制功能的丧失与I型膜基质金属蛋白酶（MT1—MMP）基因表达和蛋白质之间的联系。基因转录的增加使VHL-/-RCC细胞中MT1—MMP发生向上调节，这一作用是转录因子HIF-2[a]及sp1共同作用的结果。据称，这份论文首次报道HIF-2调节了MT1-MMP，并且提出VHL肿瘤抑制功能与MMP基因表达和蛋白质表达之间具有直接的联系。

Q10是内源性的物质，基本不会有什么副作用。但是根据生产工艺的不同，可能会有个体差别，表现为起红疹。

我最近用重组表达的方式获得了一个蛋白酶，经过实验发现活性不好，所以希望能够先用生物信息学的方式对酶的部分核酸或者氨基酸进行修饰以增强其活性，不知道有没有老师做过或者知道怎么做，非常感谢，急求！！！

相关疾病：胸腔积液结核病有个患者胸水中的乳脱是1245U/l,血清是213U/l，想请教，血清和胸水中的乳脱有关系吗？

现在在做酶抑制剂，通过检测酶催化反应中吸光度的变化来判断酶活，从而评定酶抑制剂的好坏。

简单的来说，抑制剂浓度增加，酶活变小，吸光度应该持续变小

然而实验测试中发现，酶抑制剂浓度增加时（由10e-9到10e-5），酶活先增加再急剧减小，求问原因？

怀疑过是我自己测吸光度不准的原因，但是平行试验，发现每次都是10e-8和10e-7这两个浓度的酶活有问题，它们甚至比不加抑制剂下的酶活更高。

求一起讨论

Title：Notch Signaling, γ-Secretase Inhibitors, and Cancer Therapy

Author:Shih IeM, Wang TL.

Resource：Cancer Res. 2007 Mar 1;67(5):1879-82.

Impact Factor：8.0（2005）

Abstract：The Notch signaling pathway represents a critical component in the molecular circuits that control cell fate during development. Aberrant activation of this pathway contributes to tumorigenesis. The role of Notch in human cancer has been highlighted recently by the presence of activating mutations and amplification of Notch genes in human cancer and by the demonstration that genes in the Notch signaling pathway could be potential therapeutic targets. It has become clear that one of the major therapeutic targets in the Notch pathway are the Notch receptors, in which gamma-secretase inhibitors prevent the generation of the oncogenic (intracellular) domain of Notch molecules and suppress the Notch activity. This review article summarizes the biological roles of Notch molecules in cancer development with special emphasis on the promise and challenges in applying gamma-secretase inhibitors as a new line of targeted therapeutic agents.

PMID: 17332312

是使超级螺旋松弛。所谓超级螺旋是DNA中张力积聚的形式。拓扑异构酶抑制成分是重要抗肿瘤药物，被认为通过稳定拓扑异构酶与DNA之间所形成的一种共价复合物来发挥作用，后者又为DNA复制机制设置了一障碍。科学家对以拓扑异构酶为作用目标的药物的药效起源仍不是很了解。本期封面图片所示为由于该药物的作用而造成的正向DNA超级螺旋的积累。DNA的这种超级缠绕会妨碍一种DNA聚合酶的前行，并且在阻止或破坏复制叉，从而导致细胞死亡过程中也可能扮演一个角色。向左转|向右转