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Quick Yeast DNA Prep: Isolation of Total DNA (genomic and plasmid)
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QuickYeastDNAPrep:IsolationofTotalDNA(genomicandplasmid)

LindaHoskins,HahnLab10/16/98

  1. Growa5mlYPDO/Ncultureinoculatedwithasingleyeastcolonyat30deg.
  2. Transferculturetoasmall13x100glasstube.Spindowncells2min.intabletopcentrifuge.Pouroffsupernatant.
  3. Washcellswith5mlH2O.Spindowncells2min.Pouroffsupernatant.Cellpelletcanbestoredat-20deg.
  4. ResUSPendcellsin500ullysisbufferbyvortexing.

    Lysisbuffer:20ml:
    0.1MTrispH8.02ml1MTris8.0
    50mMEDTA2ml0.5MEDTA
    1%SDS2ml10%SDS
    14mlH2O

  5. Addacid-washedglassbeads(400-500microns)toabout2mmbelowmeniscus.Vortex30sec.Add25ul5MNaCl.Vortex30sec.Spindown2min.todecreasefoam.
  6. RemovelysedcellswithP1000atbottomoftubeandtransfertoa1.5mlmicrofugetube.
  7. Add400ulofTE-saturatedphenol.Vortex.Spin4min.Transferupperphasetoaclean1.5mlmicrofugetube(~400ul).
  8. Add400ulphenol:chloroform(4:1).Vortex.Spin4min.Transferupperphasetoaclean1.5mlmicrofugetube.
  9. Add1ml95%EtOHandmix.Spin6min.PouroffEtOH.Washwith1ml70%EtOH.Vortex.Spin6min.PouroffEtOH.Drypelletinhoodorvacuum.
  10. Resuspendin50ulTE(vortex,37deg.10min,vortex)

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