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鉴定胎儿性别和 RhD 血型:数字 PCR 敏感性高于 qPCR
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鉴定胎儿性别对一些性染色体连锁疾病如杜氏肌营养不良、先天性肾上腺皮质增生等有极大好处。通过性别鉴定,对可能怀有出生缺陷胎儿的孕妇,早期终止妊娠,可以减轻家庭和社会的负担。

而胎儿RhD血型的鉴定,则对减少由RhD血型不合引起的新生儿溶血症的发生有重要临床意义。RhD阴性初产妇,若孕育RhD阳性胎儿,早期预防性注射抗D抗体,可以大大减少新生儿溶血症的发生。

一般来说,要鉴定胎儿性别、RhD血型和染色体异常只有通过分析胎儿的DNA才能实现。最开始只能通过侵入性的检查手段如羊膜腔穿刺获取胎儿DNA样本,但这一技术约有1%的风险导致孕妇流产,临床操作时要十分谨慎。自从在孕妇血浆中发现胎儿游离DNA(cell-freefetalDNA,cffDNA)后,非侵入性的产前检查成为现实。目前,在荷兰和丹麦等国临床常规使用qPCR法鉴定高危胎儿性别及RhD血型。

然而,最近有研究发现,相比qPCR,数字PCR(digitalPCR,dPCR)对低浓度样本检测的准确度更高。来自英国普利茅斯大学的Sillence教授等评价了这2种方法的检测效果。研究结果发表在近期的ClinicalChemisty杂志上。

该研究共收集了46名RhD阴性孕妇的外周血,其中22名受试者用普通的EDTA管收集,另外24名采用StreckCell-freeDNAbloodcolletiontubes(StreckBCTs)收集。通过检测Y染色体特异性序列TSPY1和RHD特异性靶序列(RHDexon5,RHD5和RHDexon7,RHD7)的浓度,比较不同采血管中cffDNA的比例以及qPCR和dPCR两种方法的敏感性。

结果显示,采用StreckBCTs采集的外周血cffDNA的比例(≥4%)要明显高于EDTA管(﹤2%)。用StreckBCTs管收集的外周血样本,qPCR和dPCR对TSPY1和RHD7的检测敏感性均达到100%;而对于RHD5的检测敏感性dPCR仍为100%,qPCR则降为83%。用EDTA管收集的外周血,dPCR对所有基因的敏感性均达到100%,而qPCR只有检测TSPY1基因的敏感性为100%。这一研究说明在胎儿性别鉴定及RHD血型分型上,dPCR的准确性比qPCR更高,尤其是采用EDTA管收集血液样本时。

尽管目前的大型研究均表明qPCR的准确性已相对较高,但由于母体细胞DNA的降解,造成胎儿cffDNA的比例相对下降,qPCR法假阴性结果仍然存在。将来还需要进行大规模的研究以验证dPCR对检测胎儿性别和RHD血型的准确性。单就此次研究来讲,对于那些可能需要预防性注射抗D抗体的孕妇,dPCR不失为一个更加安全、更加可靠的非侵入性诊断方法。

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