【求助】请教战友:检测一个明确的多态性位点能不能只测序,不做酶切
2021-07-30
问题描述:
我的实验中,为了检测一个明确报道的多态性位点(该位点为酶切位点)在细胞中的多态性状态,能不能用高保真酶扩增含该位点的一段序列后,直接测序?还是应该先做酶切,在测序?测序是需要做一个t载体克隆不?
期待着高手们的指点,谢谢。
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zxyapple
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直接提取dna pcr扩增后测序就行
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yaobiye
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还想请教一下,如果只测序的话会不会出现那个位点的多态性暴露不充分,也就是说会不会出现没有检测到的情况?谢谢。期待着您的指点!
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xcq1127
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如果能够酶切的当然就酶切了,除非你样本量很少,就一两个,样本多的话酶切成本比测序少得多,酶切的准确性不比测序差。测序只需要扩增出片段来就可以了,不用做克隆。的确有可能出现测序有些snp不能检出的情况,但是这种情况不常见
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yaobiye
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谢谢指教,呵呵。
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heavenmud
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测序是SNP检测的金标准!
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天堂的旮旯
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明白了,我也正在准备做相关的SNP试验,顺便请教一下,如果用酶切的话,那个内切酶怎么购买,一般买哪个公司的?
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清水幽香
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我们这一般用NEB的,找当地的代理公司。
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天堂的旮旯
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明白了,谢谢指教!
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