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Enzymatics/10x Uracil Cleavage System/750 Reactions/Y9180L
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Enzymatics/10x Uracil Cleavage System/750 Reactions/Y9180L
品牌 / 
Enzymatics inc
货号 / 
Y9180L
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The Uracil Cleavage System provides two enzymes, which, when added sequentially to a reaction containing a synthetic DNA fragment containing a deoxy-uracil, generate a single nucleotide gap at the location of the uracil residue. The system consists of two individual enzyme components, Uracil DNA Glycosylase (UDG) and Endonuclease VIII, provided at a 10X concentration to be added to a reaction containing a uracil-containing polynucleotide sequence. UDG catalyses the excision of the uracil base, creating an abasic site with an intact phosphodiester backbone (1,2). The lyase activity of Endonuclease VIII breaks the phosphodiester backbone both 3′ and 5′ to the abasic site, liberating the deoxyribose sugar (3,4).

Source of ProteinEach component protein is purified separately from E. colistrains containing recombinant Endonuclease VIII and Uracil-DNA Glycosylase genes.

Supplied with:UDG (G5010)10 mM Tris-HCl50 mM NaCl1 mM DTT0.1 mM EDTA50% glycerolpH 7.5 @ 25°C

Endonuclease VIII (Y9080):10 mM Tris-HCl250 mM NaCl0.1 mM EDTA50% glycerolpH 8.0 @ 25°C

Unit Definition, UDG1 unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 1.8 nmol of uracil in 30 minutes from double-stranded, tritiated, uracil containing-DNA at 37°C in 1X UDG Reaction Buffer.

Unit Definition, Endonuclease VlllOne unit is defined as the amount of enzyme required to cleave 1 pmol of an oligonucleotide duplex containing a single AP site in 1 hour at 37°C.

Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学,其测序产品市场占有率达80%。


酶科技公司产品包括八类:超纯连接酶如T4连接酶、超纯poly酶、ArcherTM系列测序工具(ArcherProducts)、连接蛋白、DNA修饰酶、NGS文库制备(NGSLibraryConstruction)、核酸和RNA酶。


Enzymatics是分子生物学试剂和制造服务的L先供应商,提供了无与伦比的质量,*性和价值的商业基因组科学界。该公司在美国制造商在ISO13485认证,专注于建立长期合作伙伴关系,并利用内部和外部创新的突破性技术商业化。


Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学。目前市场上80%测序产品来自Enzymatics(“Todayourproductsunderpinover80%ofthesequencingreactionsthatarerunaroundtheglobe”)。Enzymatics产品的好处之一--能提高效率:NatureMethods中提到“使用Enzymatics超纯连接酶,连接步骤的效率得以提高,连接片段的产量增加了20-30%”。好处之二--有效降低测序成本:遗传学界的泰斗GeorgeChurch更是认为Enzymatics是"apowerfulcatalystinthedemocratizationofsequencing"。合作伙伴包括:BGI,BerryGenomics,Illumina,454LifeSciences和IonTorrentSyst,皆对Enzymatics的出品赞不绝口。


Enzymatics--核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix--N2050L,N2050F

核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix

摘要:四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)

产品描述

Anequimolar(25mM)mixtureofthefournaturaldeoxynucleotides.

四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)

SuppliedAs:25mMeachdNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)atpH7.5

产品信息

PartNumberN2050L,N2050F

Concentration25mM

UnitSize100µmol,20µmol

产品特性

StorageTemperature-25to-15°C

Purity≥99%

BasePurity≥99.5%

Pyrophosphate≤0.003pmol/pmolofnucleotide

EnzScript™(MMLV逆转录酶,RNaseH-)

摘要:基于RNA的DNA聚合酶,无核酸内切酶活性

产品描述:

EnzScript™(M-MLV逆转录酶RNaseHminus)属于RNA依赖的DNA聚合酶,该酶无RNaseH活性。EnzScript™被用于从polyAmRNA或总RNA中产生首链CDNA以用于下游的一些用途,如RT-PCR,cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNaseH结构域中的点突变能增加酶的热稳定性,相比于野生型M-MLV逆转录酶,它支持全长转录物种产生更高的cDNA产量

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在过去的十年,DNA测序比过去具有更快的速度和更低的价格,这一进步主要因为二代测序技术(NGS)的发展。二代测序技术现在被广泛应用于临床实践,包括实体瘤分析、血液肿瘤分析、遗传病分析和传染病分析;无创产前检测(NIPT);植入前诊断(PGD)和筛查(PGS)。 鉴于这一快速发展的领域,2014年2月中国食品药品监督局(CFDA)和国家卫生与计划生育委员会(NHFPC)暂停了临床二代测序检测,随后颁布了一系列二代测序检测监管要求。 CF 查看更多>
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第二代测序技术的核心思想是边合成边测序(Sequencing by Synthesis),即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列,现有的技术平台主要包括Roche/454 FLX、Illumina/Solexa Genome Analyzer和Appl 查看更多>
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21世纪初期,二代测序(NGS)成为应用日益广泛的商业化技术。在十几年的时间里,数据的大量生成为分子生物学领域带来了巨大的进步。从1964年首个被测序的tRNA分子到如今人类基因组测序的实现,科技以极快的速度在发展。与此同时,引发了对高纯度、高质量的相关产品的需求,如寡核苷酸(oligonucleotides)的合成。 在文库构建过程中由于DNA接头(barcodes)的使用而造就的二代测序的多重分析能力(multiplexing ab... 查看更多>
【易文献】亲,酒虽好,千万不要和microRNA一起用哦! 来源: 查看手机网址扫一扫!扫一扫! ... 查看更多>
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蛋白质的酶水解过程研究123
℡欠诚灬2017-10-03
●目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶(proteolytic enzyme)或称蛋白酶(proteinase)已有十多种。
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转

最近在构建质粒,遇到奇怪的问题,向大牛们求助!!通过CDNA文库扩增目的基因片段后连接至载体上,转化后挑取克隆进行菌落PCR鉴定,选择阳性菌落扩增后提取质粒,再将质粒酶切鉴定,选择酶切结果正确的质粒送测序,通用引物测序结果显示上游测序结果为载体序列,无目的基因序列,下游引物无信号?!崩溃了,为嘛!我同一批做的其他几个质粒都没有问题,这个质粒构了两次了都这样。。。欲哭无泪啊,求大神们慷慨相助!!

利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段,为什么双酶切有目的片段和切开的质粒,测序却没有?

并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点(CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符),之间的怎么都没了?

SNP数据构建系统进化树123
爆儿███2b揯2017-10-02
1.TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时,该探针与模板退火,即产生了适合于核酸外切酶活性的底物,从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来,破坏两荧光分子间的PRET,发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。

用takara的in-fusion方法做了个重组质粒,如左图PCR验证,右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证,两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外,其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1,2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。

片段长度143bp,酶切位点kpn1和Hind3,连入pGL3b载体,测序引物公司用的pGL3-,第一次反向测序不成功,原因是质粒出现重叠峰,正向加测后成功,对比发现下游引物的酶切位点(Hind3)少了一个碱基(aagtcc变成aagct),重组质粒酶切切不出插入片段;之后将测序成功的质粒重新转化DH5α,再提质粒酶切还是切不出来。质粒小提试剂盒Qiagen的,提取菌液1.5mL,浓度608.2ng/uL,酶切质粒2ug。
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题(aagtcc变成agtcc),但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆,测序结果是不准确的,建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法?
正在做bmp4启动子的一段序列,两端分别加的Sac1和Nhe1的位点,pcr之后跑胶显示条带位置正确,回收后分别与pgemt-easy载体和peasy-t5zero载体连接,连接之后单酶切和双酶切均显示连接成功,但测序结果就是不对,已经测了3次,求哪位大神指教一二,多谢了!!难道真的是pcr出的序列本来就是错的?而且连接peasy-t5zero载体后双酶切切不开。我用的Sac1和Nhe1是Thermo的,正在尝试换takara的重新双酶切。
pgem-teasy载体插入片段位点两侧各有一个EcoR1的位点。

1.TaqMan探针 针染色体同SNP位点别设计PCR引物TaqMan探针进行实荧光PCR扩增探针5’-端3’-端别标记报告荧光基团淬灭荧光基团溶液存PCR产物该探针与模板退火即产适合于核酸外切酶性底物探针5’-端连接荧光探针切割破坏两荧光间PRET发荧光通用于少量SNP位点析
2.SNaPshot 该技术由美应用物公司(ABI)发基于荧光标记单碱基延伸原理型技术称测序主要针等通量SNP型项目含测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临态位点5’-端同度延伸引物PCR产物模板反应体系引物延伸碱基即终止经ABI测序仪检测根据峰移位置确定该延伸产物应SNP位点根据峰颜色知掺入碱基种类确定该本基型于PCR产物模板通重PCR反应体系获通用于10-30SNP位点析
构建重组质粒,在pSET4S质粒上插入一段基因的上下游同源臂,双酶切验证正确,同时以重组质粒为模板PCR扩增插入的片段,均与阳性对照一致,但测序结果进行NCBI比对,发现插入的一段序列不正确。而且这个重组质粒曾经构建出来过,因其中一个碱基突变所以重新构建,使用了primestar重新构建却总是测序不正确或者酶切不正确
DNAsanger测序法原理.pdf123
专心学生物2017-10-02
为甚么只有加法系统不行?最好举例说明,谢谢!!!
PCR程延伸阶段温度升72摄氏度左右高温度所溶液四种脱氧核苷酸需要耐高温Taq DNA聚合酶作用据碱基互补配原则合新DNA链