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1.抗原性是指抗原与其所诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的能力。抗原性的强弱与抗原分子的大小、化学成分、抗原决定簇的结构、抗原与被免疫动物亲缘关系的远近等有密切关系。通常认为抗原的分子量愈大、化学组成愈复杂、立体结构愈完整以及与被免疫动物的亲缘关系愈远,则抗原性愈强。
2.免疫原性是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。即指抗原能刺激特定的免疫细胞,使免疫细胞活化、增殖、分化,最终产生免疫效应物质抗体和致敏淋巴细胞的特性。也指抗原刺激机体后,机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应。
抗原修复是公认的免疫组化比较关键的一个步骤,因为我们多使用福尔马林或多聚甲醛溶液来固定组织。甲醛与蛋白质发生交联反应,覆盖抗原决定簇,极大的影响了我们的实验结果,甚至时出现假阴性的现象。抗原修复过程是由少数主要影响因素和许多非主要因素共同影响的复杂过程(这是我总结的最复杂的语句哈哈!)。如何抽丝剥茧抓住主旨呢?这需要我们对抗原修复有一个整体的认识,以不变应万变。下面通过几个小问题,带领大家去认识抗原修复:
Question1:为什么免疫组化要做抗原修复?
答:这位观众的问题很不错!简单直达要害。
我们为了得到更好的实验结果,在免疫组化过程中会对样品材料进行固定,一般常用的就是福尔马林或者多聚甲醛溶液。科学研究已经证明甲醛的醛基与蛋白质发生交联反应,不同程度的遮蔽了抗原表面的抗原决定簇,影响其与抗体结合。其发生交联反应形成的究竟是什么还没有定论,有人说形成的是醛基,有人说形成的是羧甲基。但不管是什么,都会使抗原表面的决定簇减少,影响实验结果,甚至产生假阳性。当然如果您使用的是一些其他的固定液(非醛类)就不用抗原修复了。
Question2:怎样才能获得理想的抗原修复结果呢?
答:我个人认为是主要有两方面:一是抗原修复方法的选择和修复液的搭配;二是操作人的手法和对实验的理解程度。
总的来说,是个搭配并且需要摸索的过程。需要把握的是抗原修复的实质是选对方法,然后用高压或者微波加热的手段打开甲醛与蛋白质的交联,也就是打开化学键的过程,你只要选对方法,通过温度和时间的改变来控制强度,试验并没有想像的那么难。
Question3:所有经甲醛或者多聚甲醛固定的组织都需要进行抗原修复吗?
答:绝大部分用甲醛固定的组织都需要进行抗原修复,但是也有例外。拿个中文文献举个例子《不同抗原修复法对免疫组化HBcAb染色结果》。它的结果恰恰是不修复的切片染色效果最好。推测的原因是HBcAg是乙肝病毒的壳结构蛋白,并非肝组织本身的,因而甲醛并不一定封闭它。相反的是如果你进行高压热修复,反而会让未被封闭的蛋白变性,那实验结果可想而知。(好像就没听说过学术界有保准的事,哈哈!)
Question4:抗原修复的方法有几种?如何来选择呢?
答:抗原修复的方法主要分为三大类:
①高压热修复
②微波热修复
③酶消化法
我们针对不同的抗原,采取不同的修复方法,取得较理想的染色效果。常用的免疫组化抗原修复主要有微波加热修复法、高温高压修复法和酶消化修复法等方法,抗原修复液主要是枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)和EDTA缓冲液(pH=8.0或pH=9.0)。抗原修复的方法选择,我们首先看抗原的定位,是位于细胞膜、细胞质还是细胞核。这三个位置的抗原修复难易程度排序:细胞质抗原>细胞膜抗原>细胞和抗原。
4个FAQ帮你全面了解免疫组化的抗原修复.docx(18.03k)
我们自身的细胞,蛋白也是抗原,但是自体在正常情况下没有针对自身的抗体。抗体产生的过程很复杂,我简单说一下:抗体由B细胞产生。本质是蛋白质。B细胞在成熟的过程中,编码抗体抗原识别区的那段基因会发生随机组合,这样就有可能会产生无数种抗体。但是如果一个B细胞产生了针对自身的抗体,那这个细胞就会和抚养它的细胞发生过于紧密的接触,被杀死。如果一个B细胞产生的抗体还不能识别任何抗原,那它就得不到足够的生长刺激,所以也不能存活。最后成熟的免疫细胞只占很小一部分。只有那些可以识别外源抗体的B细胞才能得到刺激,大量增殖。然后体内的抗体就增高了。
所以你的最后一句话不对。并不是人人都可以对任何抗原产生抗体的。比如青霉素过敏,过敏的人就是因为体内有针对青霉素的抗体IgE。而其他人就没有抗体。
,表示体内感染了HBV,因而是一种特异性标志。HBsAg阳性见于:①急性乙型肝炎的潜伏期或急性期(大多短期阳性);②HBV致的慢性肝病、迁延性和慢性活动性肝炎、肝炎后肝硬化或原发性肝癌等。③无症状携带者。
(2)抗HBs:表示曾感染过HBV,均已得到恢复,并且对HBV有一定的免疫力。
(3)HBcAg与抗HBc:由于
HBcAg主要存在于肝细胞核内,并仅存在于Dane颗粒中。因此,对病人血清不能检测HBcAg,而测抗HBc。血清内抗HBc阳性反映:①新近有过HBV感染;②体内有HBV增殖;③有助于诊断乙型肝炎。
(2)HBcAg和抗HBe:HBcAg的存在常表示病人血液有感染性。
HBcAg阳性揭示病人肝脏可能有慢性 损害,对预后判断有一定帮助。抗HBe阳性对病人可能有一定的保护力。
检测乙肝抗原与抗体的实际用途:
(1)筛选供血员。
(2)可作为乙肝病人或携带者的特异性诊断。
(3)对乙肝病人预后和转归提供参考。
(4)研究乙肝的流行病学,了解各地人群对乙肝的感染情况。
(5)判断人群对乙肝的免疫水平。
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