仅供科研使用，不得用于临床检验。
小鼠抗人乙肝表面抗体(HBsAb)定性检测试剂盒（ELISA）
说明书
【产品名称】
通用名称：小鼠抗人乙肝表面抗体(HBsAb)定性检测试剂盒（ELISA）
英文名称：Mouseanti-hepatitisBvirussurfaceantibody（HBsAb）ELISAKIT
【包装规格】
96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用，定性检测血清、血浆中小鼠抗人乙肝表面抗体(HBsAb)。
【检验原理】
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人乙肝表面抗原（HBsAg）的包被微孔中，依次加入标本、阴性和阳性对照、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠抗人乙肝表面抗体(HBsAb)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），判定阴阳性。
【主要组成成分】
主要成分
组分 | 数量 | 主要成分 |
阴性对照 | 1.0ml×1 | |
阳性对照 | 1.0ml×1 | |
包被微孔板 | 96T | 预包被固相抗原 |
HRP标记抗体 | 6mL | HRP标记的检测抗体 |
样本稀释液 | 6mL | |
底物液A | 6mL | 过氧化脲工作液 |
底物液B | 6mL | TMB工作液 |
20×浓缩洗涤液 | 30mL | 含0.15%Tween20的PBS |
说明书 | 1份 | -- |
自封袋 | 1个 | -- |
不干胶 | 2片 | -- |
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
【储存条件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。
2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。
3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。
【适用仪器】
半自动的酶标仪，如ThermoMK3，或者国产酶标仪。
【样本要求】
样本类型和采集
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在-20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本保存和稳定性
样本在2-8℃条件下，可以储存72h，或者在-20℃储存6个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
【检验方法】
试剂准备
1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。
操作程序
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置阴性对照孔、阳性对照孔和样本孔，阴性、阳新对照孔各加50μL对照品；
- 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
【检验结果的解释】
1.阴性对照OD值：小于0.2。
2.阳性对照OD值：大于0.8。
3.阳性判断（Cut-Off值）：阴性对照OD值+0.25，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，为阴性。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测小鼠血清、血浆中小鼠抗人乙肝表面抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【保存条件】
2℃-8℃保存，有效期6个月。
【注意事项】
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
废物处理
所有使用或未使用的试剂，所有污染性的一次性材料，应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序，每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别，进行废物和污物的处理，同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。
