请使用支持JavaScript的浏览器! 【求助】高手指点:为何抗血清纯化抗体时出现蛋白沉淀_蚂蚁淘商城
【求助】高手指点:为何抗血清纯化抗体时出现蛋白沉淀
2021-08-12
问题描述:

家兔免疫我用的是Histag的重组蛋白
纯化时准备用GSTtag的重组蛋白,蛋白是一样的
以前实验室也有人做过

前面的表达、纯化和透析的时候都好好的
当我把透析好的蛋白跟处理过的CNBr活化的Sepharose4B混合4度旋转过夜后,第二天下午就发现有沉淀。拿沉淀跑了胶,就是我得重组蛋白
另外,透析和过夜是我用的溶液都是纯化时用的PH8.3的结合缓冲液

不知道是什么原因。为什么好好的蛋白一跟Sepharose旋转过夜就会有沉淀呢

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lijk00
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降低温度,缓冲液的ph值会变化,若蛋白对ph影响较大,则蛋白的局部可能凝集沉淀
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bt20001_ren
  用户
问题是透析时用的同样的缓冲液啊,也放4度了,没沉淀是不是加了Sepharose以后旋转过夜时间不能太长啊
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