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yukim
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我 认为你用质粒和首次PCR产物进行荧光定量PCR反应都可以对你的结果不会有太大影响，通常用质粒主要原因是它比较稳定，容易定量稀释，易于保存。对于荧光定量PCR反应，如果你用预混型试剂,可以减少你优化反应体系的步骤,一般预混型试剂不需要对Mg+离子浓度进行优化,主要的优化你的引物和所使用的探针浓度(对taqman探针而言).
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