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Fluorescence Mounting Medium (Antifade)
来自 : 蚂蚁淘

MaterialsNeeded

  • 20mlglassscintillationvial
  • Smallstirbar
  • Foil
  • Glycerol
  • 1XPBS
  • Pipets
  • *P-phenylenediamine(EMDChemicalsInc.Cat#PX0730)
  • Carbonate-BicarbonateBuffer(seebelow)
  1. Wrapaglassscintillationvialwithfoilanddropinasmallstirbar.(PPDislight-sensitive.)
  2. Witha10mlpipetadd9mlsofglyceroltothevial.
  3. Withthe1000µlPipetmanadd1mlof1XPBS.
  4. Placeonstirrerandbeginmixing.
  5. Weighout10mgofp-phenylenediamineontheMettlerbalance.PPDistoxic.Wearglovesanddon’tinhaleit.
  6. AddthePPDtothevialandstiruntillitisallinsolution(1-2hrs.).Themediumshouldappearalmostcolorlesstoaslighttintofyellow.IfitisanintenseyellowororangecolorthePPDismostlikelycontaminatedandwillhavebackgroundstaining.
  7. pHthemountingmediumtoapHof8.0-9.0usingtheCarbonate-Bicarbonatebuffer.pHpaperofrange6.5-10.0shouldbeusedtocheckthepHofthemediumafteradditionof12dropsoftheCarb-Bicarbbufferandstirring.AdditionaldropsofbufferareaddeduntillthedesiredpHisreached.
  8. Aliquotthemountingmediumandstoreat-70oC.

*FlakesofPPDarelargeandshouldbecrushedCarbonate-BicarbonateBuffer

  1. Makeupa0.2Msolutionofanhydroussodiumcarbonate(2.12g/100ml)
  2. Makeupa0.2Msolutionofsodiumbicarbonate(1.68g/100ml)

Take4mlsofA+46mlsofBandbringupto200mlswithDH2O.ThepHwillbe9.2.*Note:IfthePPDiscontaminatedorgoesbad(turnsabrowncolor)itwillstainDNA,soeachpreparationshouldbetested.Checkbylookingatmitoticcellstobesurethatchromosomesarenotstained.

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