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细胞染色制片方法
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1、取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。2、将培养基换成10mlDMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基,处理1~2小时。3、将细胞培养液倒掉,马上加入3~4ml0.1%胰蛋白酶,并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后,马上加入终止液终止消化,并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中,并在1200r/min离心4min。4、将上清液倒掉,剩余50ul左右的液在管中,并轻微震动,使细胞沉淀重新悬浮。5、加入10ml的低渗液(0.075MKCL),第一毫升要逐滴加入,并边加边摇晃。6、37℃水浴中低渗30min。7、再加入1ml冰冷的固定液(甲醇:乙酸=3:1的混合液),并马上摇匀,离心,1000r/min、10min。8、同步骤4。9、加入10ml冰冷的固定液,第一毫升要逐滴加入,边加边摇晃。10、室温下固定30min,然后离心,1000r/min、10min。11、同步骤4。12、加入10ml冰冷的固定液,第一毫升要逐滴加入,边加边摇晃。13、室温下固定15min,然后离心,1000r/min、10min。14、重复步骤11~13一次。15、将离心后的上清液倒掉,并加入50~100ul的新鲜固定液重悬细胞。16、滴片(玻片要求是湿冷的干净的,滴片高度要大于30cm。玻片倾斜角度15~30度左右)17、镜检。

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