一、上样前的准备 FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细 胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。 1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。 3L70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）5L无菌蒸馏水5L无菌PBS 2、在干净的鞘液筒中加入3L70%乙醇。盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗 涤。安好鞘液筒。 3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。。 4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。5、在收集管接口处安装2支BD50ml收集管（若不使用浓缩器）。6、放上一支装有70%乙醇的进样管。 7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。 9、从Acquiremenu选择SortSetup。在SortGate菜单中选择步骤7设定的分选门。按液流控制 键RUN。 10、在Setup方框中打叉，点击AcquisitionControl菜单中Acquire。。11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause,Abort。 12、再重复上述步骤2次，共需要1h。13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入 500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直 至洗净桶内壁残余乙醇。 14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。安好鞘液筒。15、在收集管接口处安装2支新的收集管。16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。17、点击AcquisitionControl菜单中Acquire。18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击PauseAbort。 19、再重复上述步骤2次，共需要1h。20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入 3L无菌PBS盖紧盖子。安好鞘液筒。 21、在收集管接口处安装2支新的收集管。22、放上一支装有无菌PBS的进样管。 23、点击AcquisitionControl菜单中Acquire。 24、第一支收集管（最左）中收集15mLPBS后取下，使PBS由左至右流入下一收集管。重复 操作至2个管都收集了15mLPBS为止。点击Pause,Abort。 25、在收集管接口处安装2支新的收集管。若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无菌 PBS4%BSA缓冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。26、按下述分选步骤分选样本 二、分选细胞
