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Lucigen/LavaLAMP™ DNA Master Mix/30066-1/200 rxn
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Lucigen/LavaLAMP™ DNA Master Mix/30066-1/200 rxn
品牌 / 
LGC
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30066-1
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SensitiveandFastDNALAMPinanEasy-to-UseMasterMixFormat

  • Loop-mediatedisothermalamplification(LAMP):Facilitatesrunningamplificationreactionsindifficulttestenvironments,enablinguseoutsideofahigh-techlaboratory.

  • MasterMixFormat:Simplifiesreactionsetupandminimizesoptimizationrequiredtoproducethebestassayresults.

  • HighThermalStABIlity:HighlyThermostableenzyme(upto90°Cfor5min)enablespreheatingofreactionscontainingpurifiedtargetDNAwhich,dependingonthetarget,mayincreaseassaysensitivityanddecreasetimetoresults.

  • ElevatedLAMPReactionTemperature(68-74°C):ImprovesprimerspecificityandreducesbackgroundamplificationdependingontheDNAtarget.

  • Freeze-dryCompatIBLe:Enablesgenerationofroomtemperaturestabletestkitsthroughlyophilization.

  • Custom OEM ProductCustomizable:OnceprimersareoptimizedwiththeLavaLAMP™DNAMasterMix,wecanworkwithyoutogeneratecustommastermixesfurtheroptimizedforyourtargetand/ortestneeds–contactus

TheLavaLAMP™DNAMasterMixisintendedtosimplifydevelopmentandoptimizationofDNALAMP(loop-mediatedisothermalamplification)reactions.LAMPkitsarecommonlyavailableasmulti-componentkitsthatrequireoptimization(e.g.MgSO4,betaine,enzymeaswellastemperature,primerconcentration,etc.).TheLavaLAMP™DNAMasterMixgreatlysimplifiesreactionoptimizationbylimitingoptimizationtotargetspecificcomponents/conditionssuchasLAMPprimerdesign,targetconcentrationandreactiontemperature.Additionally,thismastermixisheatstableat90°Cfor≤5minutes,whichenablestheadditionofareactionpreheatingstepwhichmay,dependingonthetarget,increaseassaysensitivityanddecreasetimetoresults.Needmoreinformation?SeeourFAQs.

Loop-mediated Amplification Process (LAMP)

Figure1.Simplifiedoverviewoftheloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)process.Forsimplicity,4/6potentialLAMPprimersareillustrated.Theinclusionoftwoadditionalprimers,F-Loop;ForwardLoopPrimerandB-Loop;BackwardLoopPrimer,oftensignificantlyenhancesamplification.Formoreinformation,pleasevisittheEikenwebsite.


LavaLAMP-loop-mediate-amplification-reaction-easy

Figure2.IllustrationofthedifferencesinLAMPreactionsetupandpotentialoptimizationparameterswhenusingamastermixvs.acomponentkitformat.PanelAillustratesthecomponentsaddedtoaLAMPreaction(left)whenusingtheLavaLAMPDNAMasterMixandthevariousparametersthancanbeoptimized(right).PanelBalsoilllustratesreactionsetup(left)andpotentialoptimizationparameters(right)whenusingastandardLAMPcomponentkit.


Loop-Mediated Isothermal Amplification enzyme faster detection.

Figure3.Loop-mediatedisothermalamplification(LAMP)withreal-timefluorescentdetectionofamplifiedproducts.LAMPreactionsweresetupusingtheindicatedkitsaccordingtomanufacturer’srecommendations.TargetDNA(C.difficile)atvaryinginputamounts,tcdAtargetLAMPprimers,andGreenFluorescentDye(LavaLAMPKit)wereincludedinallreactions.ReactionswererunonaCFX96ThermalCycler(Bio-Rad)atthefollowingtemperatures:LavaLAMP;68°C;otherkitsattherecommended65°Candfluorescencewasmeasuredover60minutestodeterminetheTTR.NTC=NoTargetControl.


Thermostable LAMP Enzymn

Figure4.TestingthethermostabilityoftheLavaLAMP™DNAMasterMix.TwosetsoftriplicateLAMPreactionsweresetupusingtheindicatedamountsoftargetDNA(C.difficile),tcdAtargetLAMPprimers,andGreenFluorescentDye.Onesetofreactionswaspreheatedto90°Cfor5minutes,andthenallreactionswereincubatedfor60minutesonaCFX96ThermalCycler(Bio-Rad)at68°CandfluorescencewasmeasuredduringthecourseofthereactionstodeterminetheTTR.NTC=NoTargetControl.


LAMP Enzyme can be lyophilized

Figure5.TestingtheperformanceoflyophilizedLavaLAMP™DNAMasterMix.TheLavaLAMPDNAMasterMix(12.5µL)wasaliquotedintotubesandlyophilizedusingaVirTisWizard2.0.Afteroneday,eachlyophilizedtubewasreconstitutedin12.5µLwater.ThensixreplicateLAMPreactionsperconditionweresetupusingthereconstitutedlyophilizedmastermixandthestandardLavaLAMPDNAMasterMix(Controls).TheindicatedamountsoftargetDNA(S.aureus),clfAtargetLAMPprimers,andGreenFluorescentDyewereaddedtothereactions.Allreactionswereincubatedfor60minutesinaCFX96ThermalCycler(Bio-Rad)at68°CandfluorescencewasmeasuredduringthereactionstodeterminetheTTR.NTC=NoTargetControl.

 


Figure6.Analysisofdaytodayvariability.Onthreedifferentdays,sixreplicateLAMPreactionsweresetupperconditionusingtheindicatedamountsoftargetDNA(M13mp18),M13mp18targetLAMPprimers,andGreenFluorescentDye.OneachdaythereactionswererunonaCFX96ThermalCycler(Bio-Rad),amplificationwasmonitoredinreal-time,andthenresultswereanalyzedtodeterminetheTTR.NTC=NoTargetControl.

ORDERINFORMATION

BothLavaLAMP™DNAMasterMixkitscontain:LavaLAMPDNAMasterMix,DNAPositiveControlLAMPPrimerMix,andDNAPositiveControl.TheLavaLAMPDNAMasterMixwithDyealsocontainsGreenFluorescentDyeforfluorescentdetectionofamplifiedDNA.

Licensinginformation:LucigenisafullylicensedproviderofLAMPreagentsforresearchuse.PatentsWO00/28082,WO01/34790,andWO01/77317regardingtheLAMPmethodareownedbytheEikenChemicalCo.Ltd.LavaLAMP™,OmniAmp®andBstPolymerase,ExonucleaseminusaresoldbyLucigenunderlicenseforuseinLAMPforresearchuseonly.TheproductsmaynotbeusedforLAMP-basedhumanordiagnosticpurposeswithoutobtainingalicensefromEiken.USPatent8093030forLavaLAMPandOmniAmpisownedbyLucigenCorp.

Itisthesoleresponsibilityofthebuyertoensurethatuseoftheproductdoesnotinfringethepatentrightsofthirdparties.Ifthepurchaserisnotwillingtoaccepttheseuselimitations,LucigenCorporationiswillingtoacceptreturnoftheproductforafullrefund.

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食品药品监管总局办公厅关于恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定的通知食药监办械管〔2015〕75号2015年06月11日发布各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局:
  为适应医疗器械监督管理工作的需要,总局组织有关单位和专家对恒温核酸扩增检测仪等22个产品的管理类别进行了界定。现通知如下:
  一、作为Ⅲ类医疗器械管理的产品(1个)
  恒温核酸扩增检测仪:由检测系统、加热模块、温控系统、触摸屏和随机软件组成。基于荧光检测的恒温核酸扩增检测技术,定性检测样本中的目标核酸有无扩增。分类编码:6840。
  
  二、作为Ⅱ类医疗器械管理的产品(7个)
  (一)免疫磁微粒捕获仪:由蠕动泵、管路、永磁铁及其他必要辅助器具组成。用于磁微粒免疫分析中捕获磁微粒复合物,是临床免疫磁微粒检验分析的前处理设备。分类编码:6841。
  (二)精液采集器:由精液收集套、润滑剂、精液采集管、采集漏斗、袖珍剪组成。产品以无菌型式提供。临床上用于收集成年男性精液,为评价男性生育能力提供完整标本。分类编码:6841。
  (三)干式血细胞微量样品测试管:由测试管体、封管器、浮子、肝素钠抗凝剂和荧光吖啶橙染料组成。用于收集末梢血样和静脉血样,临床上与干式血细胞计数仪配合使用,对样本染色、抗凝和分类。分类编码:6841。
  (四)胎盘生长因子检测试剂盒(时间分辨荧光法):由校准品、铕标示踪抗体、分析缓冲液、生物素抗体、链霉亲和素微孔板条、条形码标签等组成。用于定量测定孕妇血清中的胎盘生长因子。临床上用于辅助筛查妊娠妇女孕早期唐氏综合症风险。分类编码:6840。
  (五)脂联素检测试剂盒(免疫比浊法):由试剂1(缓冲液)和试剂2(乳胶抗体试剂)组成。用于体外定量检测人血清或血浆中脂联素浓度。临床上用于评估2型糖尿病和心血管疾病的风险。分类编码:6840。
  (六)小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(直接清除法):由试剂(含过氧化氢酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脂酶、显色剂的缓冲液)和试剂(含过氧化物酶、酶稳定剂、显色剂的缓冲液)组成。用于体外定量检测人血清中小而密低密度脂蛋白胆固醇的含量,临床上用于动脉粥样硬化的辅助诊断。分类编码:6840。
  (七)尿液游离LamBDa-轻链测定试剂盒(免疫比浊法):由定标液、试剂缓冲液和试剂(游离Lambda-轻链抗血清)组成。用于体外定量测定尿液游离Lambda-轻链浓度,临床上用于单克隆丙种球蛋白增多症的辅助诊断。分类编码:6840。
  三、作为第Ⅰ类医疗器械管理的产品(13个)
  (一)制片染色一体机:通常由离心模块、制片模块、染色模块、控制系统等功能模块组成。用于病理分析前对人体细胞或细菌样本进行制片及染色。分类编码:6841。
  (二)细胞分离制片染色一体机:通常由控制系统、过滤器、多路阀注射泵、贮液瓶、废液瓶等组成。适用于病理分析前对人体外周血或组织样本中细胞的分离、过滤、制片和染色。分类编码:6841。
  (三)试剂卡孵育器:由塑料外壳、温控模块、电器元件组成。用于特定试剂卡的孵育。分类编码:6840。
  (四)细胞过滤采集器:由软管、过滤收集病变细胞装置、抽吸装置组成。用于病理分析前对人体内脱落病变细胞的采集。分类编码:6841。
  (五)液基细胞和微生物处理、保存试剂:主要由细胞保存液、细胞裂解液、提取液、稀释液、消化酶、防腐剂等及必要的细胞承载或制片器具组成。用于临床检验分析前细胞或微生物的保存、运输、提取、分离、沉淀、固定、制片等。分类编码:6840。
  (六)病理分析前处理试剂:主要由组织固定液、组织脱水液、透明液、清洗剂等组成。用于病理分析前组织标本的固定、梯度脱水、透明、浸蜡和包埋制片。分类编码:6840。
  (七)脱蜡液:由脱蜡液、防腐液、专用水等组成。用于对样本进行染色前预处理,去除石蜡包埋组织样本上的石蜡。分类编码:6840。
  (八)触发缓冲液:由0.9%的氯化钠等渗溶液组成。与血小板功能分析仪及配套检测试剂盒配套使用,用于在检测前润湿生化活性膜。分类编码:6840。
  (九)流式细胞分析用鞘液:由含盐缓冲液和防腐剂组成。用于与流式技术相关的分析中对样本进行检测时形成鞘流,以利于仪器进行计数分析。分类编码:6840。
  (十)流式细胞分析用溶血剂:由浓度小于2%的甲醛和浓度小于15%的甘油组成。用于快速裂解人类外周血中红细胞,维持白细胞基本形态,临床上用于流式细胞仪检测前样本处理。分类编码:6840。
  (十一)抗体稀释液:由缓冲液和防腐剂组成。用于临床检验时抗血清的稀释。分类编码:6840。
  (十二)溶痰剂:由次氯酸钠、表面活性剂组成。用于抗酸染色前痰标本的均质化处理,以提高阳性检出率。分类编码:6840。
  (十三)精液液化剂:由菠萝蛋白酶和蔗糖组成。用于精液检查前促进液化迟缓的精液标本的液化、降低精液的粘稠度。分类编码:6840。
  四、不按照医疗器械管理的产品(1个)
  瓷珠菌种保存管:由表面多孔的小瓷珠、胰蛋白脉大豆肉汤、甘油和蔗糖按一定比例混合组成。用于微生物检验中菌种的保存。
  自本文件发布之日起,对于不作为医疗器械管理的,如已受理尚未完成注册审批的,食品药品监管部门应按规定不予注册,相关注册申请资料予以存档。尚在有效期内的医疗器械注册证书不得继续使用。
                            食品药品监管总局办公厅
                             2015年6月11日
恒温扩增技术是什么? 123
oiljdljdio2018-01-24
操作方法?
原理?(没有就算了...)
答的好的提高悬赏50分
有原理的追加50分
谢谢啊~~~~
(1)严格分区操作,样品提取区、配液区、扩增区、检测区应相互独立,各区耗材及移液器应专用,实验前先用紫外线消毒以破坏残留的核酸。
(2)操作多份样品时,应先配制反应混合液并分装,减少操作,避免污染,同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染,移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的,吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染,使用一次性手套,EP管与吸头应一次性使用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心,吸样要缓慢,防止样品进入移液器内;吸样时尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻,以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存,防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验,既可验证LAMP反应的准确性,又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理,尽量避免开盖检测,开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测,有效防止污染发生。展开
各位战友:

今天发现,我在核酸技术区开辟的“DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论”4个月,今天回帖数破100,点击达1500多次。能和大家一起分享和交流,并且得到共同提高,心情很是愉快。

所以想借PCR技术区的宝地,新开辟“环介导等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)专题讨论”。我做LAMP一年多了,有些经验。而最近,和我谈起LAMP的朋友明显增多。所以在这方面大家有什么心得、体会、资料和实验困难,希望能一起交流讨论。谢谢支持!
PCR技术在食品检测中的应用123
绿萝2015的春天2018-01-24
应用很广泛,因为比荧光定量PCR的操作简单方便,无需专业人员操作,仪器的性价比也比较高,挺受食品企业的追捧,食药系统也用的不少,现在技术越来越成熟,以后的应用会越来越广
实验三PCR扩增制备目的基因123
南昌中洪博元小梅2016-05-09

1.目的
学会PCR操作的基本技术。

2.原理
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2(A+T)+4(G+C)。

3.器材
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,0.2mlPCR微量管,双面微量离心管架,PCR仪,台式离心机琼脂糖凝胶电泳系统,水漂,恒温水浴。

4.试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶,PCR缓冲液(10×,MgCl2free),25mMMgCl2,dNTP,引物,模板质粒pBS-CHI,无菌ddH2O。

5.实验准备
dNTP混合液(每种25mM),TAE电泳缓冲液荧光染料,10´加样缓冲液,1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。合成的引物:Senseprimer5'-GGATCCACAATGATGAGAGCC-3'
Antisenseprimer5'-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-3'

目的基因模板质粒:已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶(chitinase,CHI)基因。
待扩增的CHI片段长度:996bp。

6.操作步骤
(1)在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。(以下加样量供参考,括号内是最终需要量,实验时需参照Taq酶说明书计算)
ddH2O32μl
10×PCRbuffer(不含MgCl2)5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl(每种dNTP终浓度0.2mM)
10μmol/LPrimer12μl(12.5~25pmoles)
10μmol/Lprimer22μl(12.5~25pmoles)
模板质粒1μl(1×10-3pmoles)
5U/μlTaq酶1μl(5U)
总体积50μl

(2)根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序:
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
(3)PCR结束后,取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
(4)清理桌面,撰写实验报告。
(5)PCR产物可以直接与T载体连接(见实验五),然后转化感受态细胞(见实验八)。

7.思考
(1)复性温度如何确定?
(2)为什么要在最后延伸10min?
(3)是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何才能消除?

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有人知道交叉引物核酸恒温扩增(CPA)的扩增原理吗?希望高手不吝赐教,最好是图文并茂的那种,谢谢了先!
目前,我在研究有关LAMP的技术,但做了十几次都没有作出来,国外做的多数是用环介导的扩增试剂盒做的,而我们国内买不到相关的试剂,只能是自己配。不知是我配制的试剂不准,还是方法不对,总之是做不出来。有那位大侠做过这个技术的,希望能给我指点,或者我们交流一下。我qq号码为:86339603
分子生物学实验报告123
louise36532021-07-23
前天我做pXJ41-p21质粒扩增,所用的新霉素终浓度是60μg/ml。但经过培养过夜后,昨天下午都未出现菌落,不知是不是新霉素浓度过高?还是感受态细菌的问题?刚开始摸索,未设空白对照。请教各位高手,是何原因?
以下是质粒质粒扩增步骤:
1.取400μlLB液先置于37℃水浴30分钟
2.100μlJM109(存于-80℃)于冰上解冻
3.解冻后加入50ngDNA质粒(对照只加感受态细胞)冰浴30分钟(计时)
4.42℃水浴90秒
5.冰浴2分钟
6.加入400μlLB液
7.37℃恒温摇床200rpm摇匀1小时
8.取200μl平均分布(旋转平皿)于培养基上,倒扣培养皿37℃过夜
比较简易的装置,可携带。但是通量小
大家好,现在做LAMP结果颠倒了,阴性对照会出现LAMPladder条带,而加了基因组DNA的反而扩增不出来,有没有人遇见这种情况?最后如何解决了呢?
扩增一个鸭的基因,PCR仪Bio-Rad的mycycler系列,通过升级后可以做梯度(8个温度梯度)PCR。
近期老是出问题,梯度(47~53℃)扩增时共6个温度有较明亮的条带,确定恒温再次扩增,却无任何产物。
请教大家了,着急的很!
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